VEGF shRNA表達質(zhì)粒抑制血管內(nèi)皮細胞VEGF表達及角膜新生血管的研究.pdf

1、目的：探討RNA干擾對血管內(nèi)皮細胞（ECs）中VEGF表達及大鼠堿燒傷后角膜新生血管（CNV）是否具有抑制作用。 方法：用DNA重組技術(shù)設計合成針對VEGF mRNA的3條shRNA寡核苷酸片段，構(gòu)建真核表達質(zhì)粒VEGF shRNA1、VEGF shRNA2和VEGF shRNA3，然后將質(zhì)粒通過脂質(zhì)體介導分別轉(zhuǎn)染ECs，RT-PCR和Western blot分別檢測ECs中VEGF mRNA和蛋白表達及干擾效率，并篩選出干擾效

2、率最高的質(zhì)粒（VEGF shRNA3質(zhì)粒）進行體內(nèi)實驗。建立大鼠堿燒傷后CNV模型，實驗組于結(jié)膜下注射VEGF shRNA3質(zhì)粒后，顯微鏡下觀察CNV生長情況，7天后利用RT-PCR及Western blot分別檢測角膜組織VEGF mRNA和蛋白的表達。 結(jié)果：經(jīng)酶切及測序證實重組質(zhì)粒構(gòu)建成功。VEGF shRNA1、VEGF shRNA2和VEGF shRNA3質(zhì)粒均可下調(diào)ECs中VEGF mRNA和蛋白的表達，其中VEGF

3、 shRNA3質(zhì)粒的抑制作用較強，VEGF mRNA和蛋白的抑制率分別為68.92％和66.22％。VEGF shRNA3質(zhì)粒轉(zhuǎn)染細胞后48h和72h的VEGF mRNA和蛋白抑制率均較24h高，48h和72h間差異無統(tǒng)計學意義。體內(nèi)實驗中實驗組CNV面積明顯減少，VEGF mRNA和蛋白在角膜組織中的表達明顯降低，抑制率分別為41.84％和41.86％。 結(jié)論：構(gòu)建的VEGF shRNA質(zhì)粒能有效抑制ECs中VEGF mRNA和