羊膜培養(yǎng)液抑制兔角膜上皮細(xì)胞血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）表達(dá)的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、臨床上,羊膜角膜移植及羊膜移植眼表重建均顯示了其抑制角膜新生血管的作用,為理解這一作用的機(jī)制,應(yīng)用可能釋放多種細(xì)胞因子的羊膜培養(yǎng)液,對角膜上皮細(xì)胞中血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子(VEGF)和堿性成纖維細(xì)胞生長因子(bFGF)表達(dá)的影響進(jìn)行研究.方法:取含有完整角膜上皮細(xì)胞的新鮮兔角膜組織(死亡時(shí)間小于2h),經(jīng)2.5g·ml<,-1>胰蛋白酶+0.2g·L<,-1>EDTA的混合消化酶處理后,刮除并收集角膜上皮細(xì)胞,以5×10<,5>個(gè)·ml<

2、,-1>細(xì)胞數(shù)接種到25ml培養(yǎng)瓶中,細(xì)胞培養(yǎng)至形成融合性生長.胰酶消化細(xì)胞傳代,細(xì)胞分別接種于35mm培養(yǎng)皿及自制的羊膜培養(yǎng)皿上.實(shí)驗(yàn)分為4組,每組設(shè)5個(gè)平行孔.用含15﹪胎牛血清的DMEM培養(yǎng)液培養(yǎng)傳代細(xì)胞形成70﹪融合性生長,將各組中的培養(yǎng)液換為無血清的DMEM培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)12h,以去處其它活性成分的影響.12h后,接種于35mm培養(yǎng)皿的第二組中加入去上皮的羊膜培養(yǎng)液,向第三組中加入未去上皮的羊膜培養(yǎng)液,其余兩組仍用無血清的DM