浙貝母種質(zhì)資源的分子指紋鑒定技術(shù)研究.pdf

1、RAPD(random amplified polymorphic DNA)技術(shù),是一種可對(duì)整個(gè)未知序列的基因組進(jìn)行多態(tài)性分析的分子技術(shù)。它是建立在PCR基礎(chǔ)之上,用基因組DNA做模板,用單個(gè)人工合成的隨機(jī)多態(tài)核苷酸序列(通常為10個(gè)堿基對(duì))做引物,通過Taq酶的作用,進(jìn)行PCR擴(kuò)增。ISSR(intersimple sequence repeat)技術(shù),是一種在微衛(wèi)星基礎(chǔ)上的分子標(biāo)記。它用錨定的微衛(wèi)星DNA做引物,即加2-4個(gè)隨機(jī)核苷

2、酸在SSR序列的3’端或5’端。PCR反應(yīng)時(shí),引物能夠引起特定位點(diǎn)退火,使得與引物互補(bǔ)的間隔不太大的重復(fù)序列間的DNA片段進(jìn)行PCR擴(kuò)增。
　　 浙貝母是我國傳統(tǒng)的中藥材,是著名的“浙八味”之一,具有較高的藥用和經(jīng)濟(jì)價(jià)值。目前,它的栽培基地主要分布于鄞州、磐安、縉云等地區(qū),而磐安已成為浙貝母主產(chǎn)地,同時(shí)也是浙貝母良種選育與種苗輸出的重要基地。但實(shí)際調(diào)查發(fā)現(xiàn),磐安地區(qū)的浙貝母存一在著種質(zhì)資源混雜的現(xiàn)象。這對(duì)浙貝母的育種產(chǎn)生了不良的

3、影響。本文針對(duì)磐安地區(qū)的浙貝母進(jìn)行品種及種內(nèi)遺傳多樣性研究,為新品種選育奠定基礎(chǔ)。
　　 本文采用RAPD標(biāo)記和ISSR標(biāo)記相結(jié)合的方法,對(duì)12種浙貝母種質(zhì)進(jìn)行了分子鑒定技術(shù)的研究,結(jié)果表明:
　　 (1)RAPD標(biāo)記的多態(tài)性比率很好,大部分在90％以上,所有貝母材料間的GS平均值為0.6006,變化范圍為0.4267～0.7467。種間,磐安新渥多籽貝和磐安新渥本地大貝的GS(0.7467)值最大,南通小貝和磐安新渥多

4、籽貝的GS(0.4267)最小。在種內(nèi),磐安新渥本地種大貝的種內(nèi)GS最小,磐安新渥多籽貝種內(nèi)的GS最大。8份浙貝母品種可以分為兩大類群。第一大類群包括磐安狹葉貝母、磐安新渥大貝、磐安本地種大貝、磐安新渥多籽貝、磐安宅口狹葉貝母、磐安新渥中貝,其中磐安新渥多籽貝和磐安新渥本地大貝,磐安新渥大貝和磐安新渥中貝分別聚為了一類。第二大類群則包括南通小貝和磐安雙峰狹葉貝母。
　　 (2)ISSR標(biāo)記結(jié)果顯示,所有貝母材料間的GS平均值為0

5、.6399,變化范圍為0.4333～0.9333。在種間,南通小貝和磐安雙峰狹葉貝母的GS(0.9333)值最大,南通小貝與磐安新渥大貝、磐安新渥本地種大貝二者之間的GS(0.4333)均為最小,同時(shí)磐安新渥本地大貝與磐安雙峰狹葉貝母、南通小貝、磐安新渥多籽貝三者之間的GS(0.4333)也是最小。種內(nèi)遺傳相似性最高的是磐安新渥多籽貝,而磐安新渥本地種大貝種內(nèi)的遺傳相似性最小。
　　 (3)利用RAPD標(biāo)記和ISSR標(biāo)記這2種分

6、子標(biāo)記法建立的12種浙貝母種質(zhì)分子指紋,得到的結(jié)果基本上是一致的,即兩種標(biāo)記方法得出的種間磐安不同地區(qū)的三種狹葉貝母之間的GS均很小,南通小貝和磐安雙峰狹葉貝母之間的GS很高,同一地區(qū)的磐安新渥大貝和磐安新渥本地種大貝的GS較高;種內(nèi)GS值最高的均是磐安新渥多籽貝,而GS值最低的均為磐安新渥本地種大貝。
　　 (4)RAPD標(biāo)記和ISSR標(biāo)記技術(shù)的結(jié)果也存在一定的差異:RAPD標(biāo)記得到的磐安新渥多籽貝和磐安新渥本地種大貝的GS值