巨細胞、風疹病毒感染的實驗室診斷及臨床研究.pdf

1、目的：研究并使用兩種新的巨細胞病毒與風疹病毒的基因工程抗原，建立一種可廣泛在出生缺陷一級預防中適用的檢測巨細胞病毒和風疹病毒特異性IgG抗體的簡便、快速且實用的實驗室診斷方法，并在臨床試驗中評估這兩種病毒IgG抗體的檢測方法的臨床有效性、安全性和可實用性。
　　方法：制備兩個新的巨細胞病毒pp150/p52蛋白和風疹病毒E1蛋白，應用ELISA方法鑒定其抗原活性?；诿嘎?lián)免疫吸附實驗的間接法檢測原理，以重組抗原包被聚苯乙烯固相載體

2、，優(yōu)化實驗各環(huán)節(jié)中的條件，風疹病毒IgG抗體以世界衛(wèi)生組織提供的標準品，巨細胞病毒IgG抗體以意大利DiaSorin公司生產的試劑盒中提供的標準品標定本方法中的標準血清和質控品。在臨床試驗部分，采用雙盲法對1000例育齡婦女血清進行巨細胞病毒IgG抗體和風疹病毒IgG抗體的檢測，最終評價本研究建立的檢測方法在臨床實踐中的有效性。
　　結果：重組的巨細胞病毒pp150/p52蛋白和風疹病毒E1蛋白經鑒定表現(xiàn)出良好的抗原活性并明顯優(yōu)于

3、其他多數(shù)抗原。通過比較最佳工藝流程：我們確定使用優(yōu)化后的重組抗原；選擇碳酸鹽緩存液包被HCMV抗原、Tris緩沖液包被RV抗原、以3％脫脂奶粉作為封閉液、使用專供本研究應用的具有特色的變色標本稀釋液和血清標本保存方法。在本研究中，巨細胞病毒特異的IgG抗體檢測以0.7IU/ml作為抗巨細胞病毒IgG抗體的Cut-off值，并界定為巨細胞病毒已感染過的標準。風疹病毒特異的IgG抗體檢測則以15IU/ml作為抗風疹病毒IgG抗體的Cut-o

4、ff值并界定為可預防風疹感染的最低免疫力標準。WHO定為10IU/ml，我們考慮到低抗體水平可能發(fā)生再感染，所以定為15IU/ml。通過比較本研究方法與經FDA認證的意大利DiaSorin公司的同類試劑（標準方法）對1000例臨床標本的特異性IgG抗體檢測，隨后對檢測數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學分析，結果顯示，本研究建立的兩種方法與標準方法間的檢測結果均呈高度相關性，巨細胞病毒和風疹病毒檢測方法的Kappa值分別為0.699和0.848，卡方檢驗以及

5、McNemar檢驗得p值均小于0.05。我們建立的巨細胞病毒特異的IgG抗體檢測方法的陽性預測值、陰性預測值和診斷效率分別為97.2%（923/950）、86.0%（43/50）、96.6%（966/1000）；風疹病毒特異的IgG抗體檢測方法的陽性預測值、陰性預測值和診斷效率分別為99.6%（775/778）、82.4%（183/222）和95.8%（958/1000）。
　　結論：本研究建立的方法是針對在出生缺陷一級預防中的特