芪丹通脈片對心肌缺血-再灌注損傷大鼠GLUT1、GLUT4及糖原含量的影響.pdf

1、研究背景與目的 近年來，防治心肌缺血/再灌注損傷(ischemia/reperfusion injury, IRI)已作為急性冠脈痙攣、心臟介入術(shù)后的后續(xù)治療手段而被逐漸廣泛應(yīng)用，在臨床中日益倍受重視。能量代謝障礙是IRI發(fā)生的重要機制。無氧糖酵解對于缺血時三磷酸腺苷(adenosine triphosphate, ATP)產(chǎn)生和減輕心肌缺血損傷有重要作用。糖原是心肌重要的能源物質(zhì)之一。糖原的多少，直接關(guān)系到心肌細胞受損的情況。

2、而缺血心肌細胞中葡萄糖攝取的增加主要是由葡萄糖轉(zhuǎn)運蛋白(glucose transporters，GLUT)，GLUT1和GLUT4，從細胞器膜向細胞質(zhì)膜轉(zhuǎn)位而完成的。既往研究表明，芪丹通脈片（Qidan Tongmai Tablet, QDTMT）能夠增加Ca2+-ATPase，Mg2+-ATPase，Ca2+-Mg2+-ATPase活性，抑制Ca2+內(nèi)流，降低心肌細胞及其線粒體中Ca2+含量，減輕鈣超載；還可增加心肌線粒體超氧化物歧

3、化酶( superoxide dismutase，SOD)、谷胱甘肽過氧化物酶(glutathione peroxidase，GSH-Px)活性，降低線粒體丙二醛（malondialdehyde，MDA）含量，以有效地消除或抑制氧自由基( oxygen free radical，OFR)的破壞作用，縮小缺血和缺血/再灌注所致的心肌梗死面積，提高心肌的抗氧化能力，改善心功能。為了進一步探討QDTMT保護心肌IRI的機制，我們采用冠脈結(jié)扎法

4、復(fù)制大鼠心肌IRI模型，觀察QDTMT對實驗性大鼠IRI心肌細胞GLUT1、GLUT4表達以及糖原含量的影響。 研究方法及內(nèi)容 1. 動物模型的建立 健康雄性SD大鼠36只，體質(zhì)量220～250g，隨機分為以下6組，每組各6只：正常組，假手術(shù)組，模型組，QDTMT高劑量組（3.24 g/kg），低劑量組（0.36 g/kg）及恬爾心組（5 mg/kg）。用等體積生理鹽水或藥液每日灌胃1次，連續(xù)7d。于末次灌胃40

5、 min后采用冠狀動脈結(jié)扎法造模。模型組及各給藥組結(jié)扎冠脈40 min，再灌注4 h；假手術(shù)組只穿線不結(jié)扎。 2. 組織標本的采集與處理 實驗結(jié)束時速取再灌注區(qū)心肌組織，其中一部分固定留做糖原染色，一部分于-70℃凍存留做Western blot，另一部分固定留做免疫熒光染色。 3. 采用過碘酸-希夫(氏)染色（Periodic acid-schiff , PAS）法糖原染色 觀察心肌細胞糖原含量變化：標

6、本經(jīng)過固定、包埋、切片等處理，于光鏡下進行觀察。采用Western blot方法分別檢測各組動物心肌細胞中GLUT1、GLUT4的表達，并用免疫熒光染色方法觀察各組動物心肌細胞膜及細胞內(nèi)GLUT1、GLUT4表達的變化。 實驗結(jié)果 1. 模型組糖原染色較淡，提示心肌細胞內(nèi)糖原含量顯著減少；QDTMT高劑量組、低劑量組和恬爾心組糖原染色較深，提示心肌細胞內(nèi)糖原含量部分減少；正常組，假手術(shù)組反應(yīng)糖原染色更深，提示心肌細胞內(nèi)糖

7、原含量未見明顯減少。 2. 與正常組相比，模型組、QDTMT高劑量組、低劑量組和恬爾心組GLUT1、GLUT4蛋白表達水平增加（P＜0.05），假手術(shù)組GLUT1、GLUT4蛋白表達水平無顯著變化（P＞0.05）；與模型組相比，QDTMT高劑量組、低劑量組和恬爾心組GLUT1、GLUT4蛋白表達水平顯著增加（P＜0.05）；與恬爾心組相比，QDTMT高劑量組GLUT1、GLUT4蛋白表達水平無顯著差異（P＞0.05），QDTMT

8、低劑量組GLUT1、GLUT4蛋白表達水平減少（P＜0.05）。 3. 正常組和假手術(shù)組心肌細胞膜GLUT1、GLUT4未見明顯表達，模型組細胞膜GLUT1、GLUT4表達較明顯，QDTMT高劑量組、低劑量組和恬爾心組細胞膜GLUT1、GLUT4表達明顯增強。 結(jié)論與提示 1. QDTMT能減少IRI心肌細胞內(nèi)糖原消耗，這可能是QDTMT減輕心肌IRI的機制之一。 2. QDTMT能上調(diào)IRI大鼠心肌細胞