吲哚胺2，3-雙加氧酶在乳腺癌中的表達及其與腫瘤血管形成關系的初步研究.pdf

1、目的:
　　 研究吲哚胺2,3-雙加氧酶(Indoleamine2,3-dioxygenase,IDO)在乳腺癌中的表達及相應組織內(nèi)的CD31、CD105標記的腫瘤微血管密度(microvesseldensity,MVD),明確乳腺癌中IDO蛋白的表達與臨床病理特征的關系及其預后的意義,同時尋找IDO與MVD之間的關系。利用Transwell小室,建立表達IDO的腫瘤細胞MCF-7與人臍靜脈內(nèi)皮細胞HUVEC共培養(yǎng)模型,檢測腫瘤

2、細胞分泌的IDO對HUVEC的增殖、CD105表達情況及成管能力的影響,探討IDO在乳腺癌血管形成過程中發(fā)揮的作用及可能機制。
　　 方法:
　　 1.收集天津醫(yī)科大學附屬腫瘤醫(yī)院2004年1月手術切除的乳腺癌石蠟切片40例,免疫組織化學法檢測IDO、CD31、CD105的表達情況,觀察IDO表達與臨床病理特征的關系及其預后的意義,同時分析IDO表達與MVD的關系。
　　 2.半定量RT-PCR法檢測IDO基因的

3、表達情況,篩選表達IDO的乳腺癌細胞系。
　　 3.建立表達IDO的人乳腺癌細胞系MCF-7與人臍靜脈內(nèi)皮細胞HUVEC共培養(yǎng)模型,利用IDO抑制劑1-甲基色氨酸(1-MT)阻滯IDO活性,細胞計數(shù)法檢測MCF-7分泌的IDO作用后HUVEC增殖情況,流式細胞儀檢測CD105表達率變化,基質(zhì)膠實驗觀察HUVEC形成管樣結構能力的變化情況。
　　 結果:
　　 1.免疫組化結果顯示乳腺癌組織中IDO蛋白表達率為67

4、.5％(27/40),低表達或不表達率為32.5％(13/40)。乳腺癌組織中IDO表達水平與患者臨床分期和腋窩淋巴結轉移密切相關(P<0.05)。
　　 2.乳腺癌組織中IDO蛋白高表達組的患者3年、5年無瘤生存率均低于IDO蛋白不表達或低表達組,分別為88.9％(24/27)與100％(13/13)、85.2％(23/27)與92.3％(12/13),但差異無統(tǒng)計學意義。
　　 3.乳腺癌組織中IDO表達水平與CD1

5、05標記的MVD(MVD-CD105)正相關(rs=0.659,P<0.05),與CD31標記的MVD(MVD-CD31)無關。
　　 4.RT-PCR結果顯示:人乳腺癌細胞系MDA-MB-231、MDA-MB-435S、MDA-MB-453、SK-Br-3、MCF-7、T47D、ZR-75-1中,MCF-7、MDA-MB-435S、T47D的IDO表達水平較其余細胞系高。
　　 5.利用Transwell小室,建立表達

6、IDO的人乳腺癌細胞系MCF-7與人臍靜脈內(nèi)皮細胞HUVEC共培養(yǎng)模型,使用IDO抑制劑1-甲基色氨酸(1-MT)阻滯IDO活性,通過倒置顯微鏡觀察細胞形態(tài),同時利用細胞計數(shù)法繪制HUVEC細胞生長曲線發(fā)現(xiàn):MCF-7共培養(yǎng)后HUVEC增殖明顯,加入1-MT后這種增殖作用幾乎完全被抑制。
　　 6.流式細胞檢測結果顯示:HUVEC細胞表達CD105,48h表達率最高；MCF-7共培養(yǎng)后促進HUVEC細胞表面CD105的表達,48

7、h作用最明顯；加入1-MT后CD105的表達率降低。
　　 7.基質(zhì)膠成管實驗結果顯示:HUVEC可以形成管樣結構；MCF-7共培養(yǎng)后管樣結構形成增加,24h作用最明顯；加入1-MT組幾乎無管樣結構形成。
　　 結論:
　　 1.乳腺癌組織中IDO蛋白表達率為67.5％(27/40),且其表達水平與腫瘤臨床分期和腋窩淋巴結轉移密切相關(P<0.05),IDO高表達組的3年、5年無瘤生存率均低于IDO不表達或低表達

8、組,但差異無統(tǒng)計學意義。提示腫瘤組織中IDO的表達水平與乳腺癌的進展和轉移相關。
　　 2.乳腺癌組織中IDO表達與MVD-CD105正相關(rs=0.659,P<0.05),與MVD-CD31無關,提示IDO可能通過促進腫瘤新生血管形成進而加速腫瘤的進展,同時說明CD105標記的腫瘤新生血管可能較CD31所標記的血管對腫瘤轉移的意義更大。
　　 3.人乳腺癌細胞系MDA-MB-231、MDA-MB-435S、MDA-M