吲哚胺2，3-雙加氧酶介導(dǎo)鼻咽癌腫瘤免疫耐受的機(jī)制初探.pdf

1、鼻咽癌是一種在中國(guó)南方地區(qū)發(fā)病率較高的惡性腫瘤。盡管鼻咽癌患者體內(nèi)存在腫瘤特異性T淋巴細(xì)胞，而且鼻咽癌組織內(nèi)往往有大量淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)，但是大部分中晚期的鼻咽癌病人即使接受了相應(yīng)的治療后病情仍然惡化。近年來(lái)，鼻咽癌的腫瘤免疫治療逐漸成為研究熱點(diǎn)。為了發(fā)揮腫瘤免疫治療的最佳療效，人們必須對(duì)影響免疫治療效果的腫瘤免疫耐受機(jī)制有一個(gè)清楚而全面的認(rèn)識(shí)。因此，為了闡明鼻咽癌患者體內(nèi)的腫瘤免疫耐受機(jī)制，尋找浸潤(rùn)的淋巴細(xì)胞無(wú)法清除鼻咽癌細(xì)胞的原因，本研究

2、主要探討了吲哚胺2,3-雙加氧酶(IDO)在鼻咽癌中的表達(dá)特性以及鼻咽癌表達(dá)IDO對(duì)淋巴細(xì)胞殺傷活性的影響，以期為更合理地設(shè)計(jì)鼻咽癌的腫瘤免疫治療方案提供一定的理論依據(jù)。 主要研究包括以下三個(gè)部分： 一、IDO蛋白表達(dá)檢測(cè)和酶活性分析方法的建立 通過(guò)制備兔抗人IDO多克隆抗體和建立檢測(cè)IDO降解色氨酸所得的特異性代謝產(chǎn)物犬尿氨酸的高效液相色譜法(HPLC)，本部分檢測(cè)了多種腫瘤細(xì)胞和組織內(nèi)IDO的表達(dá)情況。結(jié)果顯

3、示，所制備的抗體效價(jià)高、特異性好，適用于在免疫印跡法(WB)和免疫組化法(THC)中檢測(cè)腫瘤細(xì)胞內(nèi)和組織內(nèi)IDO蛋白的表達(dá)情況；所建立的定量檢測(cè)犬尿氨酸的HPLC快速、簡(jiǎn)便，適于大批量樣品的檢測(cè)。本部分為檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)IDO的蛋白表達(dá)和酶活性奠定了基礎(chǔ)。 二、IDO在鼻咽癌中的表達(dá)特性 利用IHC、WB和HPLC，本部分檢測(cè)了IDO在鼻咽癌組織中表達(dá)、γ干擾 素(IFN-γ)對(duì)CNE2鼻咽癌細(xì)胞內(nèi)IDO蛋白表達(dá)和酶活

4、性的影響以及激活的淋巴細(xì)胞對(duì)CNE2細(xì)胞內(nèi)IDO蛋白表達(dá)的影響。結(jié)果顯示，鼻咽癌患者腫瘤組織中存在IDO的表達(dá)；CNE2細(xì)胞在IFN-γ和激活的淋巴細(xì)胞的作用下能表達(dá)IDO；IFN-γ濃度低至5 U·ml-1就能誘導(dǎo)CNE2細(xì)胞表達(dá)IDO；CNE2細(xì)胞在IFN-γ作用下8小時(shí)后即能表達(dá)IDO，而且CNE2細(xì)胞內(nèi)的IDO一旦被合成，蛋白不易降解，可在細(xì)胞內(nèi)穩(wěn)定存在達(dá)72小時(shí)；CNE2細(xì)胞內(nèi)IDO酶活性隨著IFN-γ濃度的提高而增強(qiáng)。本部分

5、對(duì)IDO在鼻咽癌中的研究在國(guó)內(nèi)外尚屬首次。 三、鼻咽癌細(xì)胞表達(dá)IDO對(duì)淋巴細(xì)胞的影響 本部分主要模擬機(jī)體內(nèi)的腫瘤細(xì)胞和淋巴細(xì)胞相互作用的微環(huán)境，觀察IFN-γ對(duì)鼻咽癌細(xì)胞增殖的影響、人淋巴細(xì)胞在IDO高表達(dá)環(huán)境中的凋亡情況、釋放IFN吖情況以及對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺傷能力，同時(shí)運(yùn)用IDO抑制劑1-MT，觀察抑制IDO的活性對(duì)淋巴細(xì)胞殺傷活性的影響。MTT法和[3]-TdR摻入法的實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，IFN-γ對(duì)CNE2鼻咽癌細(xì)胞的增殖

6、無(wú)明顯抑制作用；Annexin V染色檢測(cè)法和WB結(jié)果顯示，IDO的表達(dá)對(duì)T淋巴細(xì)胞的凋亡和淋巴細(xì)胞釋放IFN-γ的能力并無(wú)明顯影響；LDH釋放檢測(cè)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，人外周淋巴細(xì)胞在IDO高表達(dá)的環(huán)境中對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺傷活性明顯降低，給予1-MT能使人外周淋巴細(xì)胞在IDO高表達(dá)的環(huán)境中對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺傷活性大部分恢復(fù)至正常水平。本部分結(jié)果提示我們，鼻咽癌細(xì)胞可通過(guò)表達(dá)IDO使淋巴細(xì)胞殺傷能力減弱而導(dǎo)致鼻咽癌患者產(chǎn)生腫瘤免疫耐受，這可能是浸潤(rùn)到