銀杏葉提取物對大鼠肝移植缺血-再灌注損傷凋亡及其調控基因的影響.pdf

1、第一章大鼠原位肝移植模型(oLT)的建立 目的：探討大鼠原位肝臟移植(OLT)模型的建立方法，為臨床肝臟移植的相關實驗研究提供理想的動物模型。 方法：采用Kamada’s二袖套法，并在此基礎上加以改良，共施行了150例大鼠原位肝臟移植手術。 結果：在90例定型手術中，供肝熱缺血時間0～1min，冷缺血時間90min，無肝期平均為18～22min(19.7±1.6min)。手術成功率91．1％(82／90)。

2、 結論：該動物模型穩(wěn)定可靠，可為肝臟移植的基礎及臨床相關研究提供較為理想的研究手段和方法。 第二章銀杏葉提取物對大鼠肝移植缺血/再灌注損傷凋亡及其調控基因的影響 目的：探討銀杏葉提取物(EGb)對大鼠肝移植缺血／再灌注損傷凋亡及其調控基因表達的影響。 方法：雄性SD大鼠分別作供體、受體。采用Kamada’s二袖套法建立大鼠原位肝臟移植模型，根據供肝切取前1 h是否靜脈注射銀杏葉提取物(40mg／kg)將大鼠

3、隨機分為銀杏葉提取物預處理組(EGb)；生理鹽水對照組(Saline group NS)；假手術組(Sham operation SO)。分別于供肝再灌注或假手術后2 h，6 h，24 h各時間點處死動物，檢測血清ALT和AST；HE染色切片作病理組織學檢查，TUNEL法檢測細胞凋亡；免疫組織化學檢測TNF-α及Bcl-2蛋白的表達；RT-PCR檢測新鮮肝組織中的TNF-amRNA及Bcl-2mRNA的表達。 結果：EGb組及N

4、S組血清ALT和AST水平，在供肝再灌注后2 h，6 h及24 h各時間點均明顯均高于SO組。供肝再灌注后2 h，6 h及24 h各時間點，EGb組血清ALT和AST水平均低于NS組。：EGb組及NS組細胞凋亡指數，在供肝再灌注后2 h，6 h及24 h各時間點均明顯高于SO組。供肝再灌注后2 h，6h及24 h各時間點，EGb組細胞凋亡指數均低于NS組。EGb組在供肝再灌注后2 h，6 h各時間點TNF-amRNA和TNF-a蛋白的表

5、達明顯低于NS組。EGb組在供肝再灌注后2 h，6 h及24 h各時間點Bcl一2mRNA和Bcl-2蛋白的表達明顯高于NS組。 結論：(1)細胞凋亡在肝移植I／R．損傷中占有重要地位，細胞凋亡多發(fā)生在肝移植I／R．的早期，并可能參與肝移植I／R損傷過程，與再灌注損傷的程度有一定的關系。(2)銀杏葉提取物抗凋亡機制可能與影響細胞凋亡調控基因的表達有關，即促進抗凋亡基因Bcl-2的表達和抑制促進凋亡基因TNF-α的表達。(3)銀杏

6、葉提取物預處理供肝可以有效減輕肝移植I／R損傷，其機制可能與EGb的抗氧自由基作用和減輕鈣超載有關。(4)銀杏葉提取物預處理供肝可以有效減輕肝移植I／R損傷和移植肝細胞凋亡的發(fā)生。 第三章 銀杏葉提取物對大鼠肝移植缺血／再灌注損傷中Caspase-3、Fas表達的影響 目的：探討銀杏葉提取物(EGb)預處理對大鼠肝移植的保護作用及對Fas和Caspase-3表達的影響。 方法：雄性SD大鼠分別作

7、供體、受體。采用Kamada’s二袖套法建立大鼠原位肝臟移植模型，根據供肝切取前1h是否靜脈注射銀杏葉提取物(40mg／kg)將大鼠隨機分為銀杏葉提取物預處理組(EGb)；生理鹽水對照組(Saline group NS)；假手術組(Sham operation SO)。分別于供肝再灌注后或假手術后2h、6h、24h各時間點處死動物，檢測血清ALT、AST；HE染色切片作病理組織學檢查；免疫組織化學檢測Fas，Caspase-3蛋白的表達

8、；RT-PCR檢測新鮮肝組織中FasmRNA和Caspase-3mRNA的表達。 結果：EGb組及NS組血清ALT和AST水平，在供肝再灌注后2h，6h及24h各時間點均明顯均高于SO組。供肝再灌注后2 h，6 h及24 h各時間點，EGb組血清ALT和AST水平均低于NS組。供肝再灌注后2 h，6 h及24 h各時間點銀杏葉提取物預處理組Caspase-3蛋白、Caspase-3mRNA及Fas蛋白、FasmRNA的表達均明顯