PCDGF反義核酸載體對卵巢癌細(xì)胞的抑制效應(yīng)及相關(guān)機(jī)制研究.pdf

1、第一部分:卵巢癌細(xì)胞PCDGF表達(dá)與其增殖、侵襲能力相關(guān)性的研究.目的:研究人卵巢癌細(xì)胞PCDGF的表達(dá),探討其與卵巢癌惡性表型的關(guān)系.方法:應(yīng)用半定量RT-PCR和Western blot分別檢測3株卵巢癌細(xì)胞中PCDGF mRNA和蛋白表達(dá)水平.單層細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)測定3株卵巢癌細(xì)胞的增殖能力;Boyden小室體外侵襲實(shí)驗(yàn)測定不同細(xì)胞株的侵襲能力.結(jié)論:3株卵巢癌細(xì)胞PCDGF mRNA和蛋白表達(dá)水平與其增殖、侵襲能力呈正相關(guān)(前者r<

2、,1>=0.97,r<,2>=0.89,后者r<,1>=0.85,r<,2>=0.84),提示PCDGF在卵巢癌發(fā)生演進(jìn)中可能作為獨(dú)立因素起多種作用,有望成為治療的新靶點(diǎn).第二部分:PCDGF反義RNA真核表達(dá)載體的構(gòu)建與轉(zhuǎn)染.目的:特異性封閉高度惡性人卵巢癌細(xì)胞株Sw626、A2780中PCDGF的表達(dá),并觀察其對增殖能力的抑制效應(yīng).方法:RT-PCR技術(shù)擴(kuò)增PCDGF基因cDNA保守序列,經(jīng)pGEM-T Easy載體克隆后雙酶切,反

3、向插入哺乳動物真核表達(dá)載體pcDNA3.1(+)中構(gòu)建反義PCDGF核酸載體.并通過脂質(zhì)體法轉(zhuǎn)染人卵巢癌細(xì)胞株Sw626、A2780,應(yīng)用RT-PCR和Western blot技術(shù)檢測轉(zhuǎn)染前后PCDGF mRNA和蛋白的表達(dá).結(jié)論:PCDGF反義核酸在高度惡性人卵巢癌細(xì)胞株Sw626及A2780中發(fā)揮了特異性封閉作用.為進(jìn)一步研究PCDGF的分子生物學(xué)特性及致瘤機(jī)理及今后利用反義PCDGF核酸載體治療卵巢癌提供實(shí)驗(yàn)和理論模型.第三部分:

4、PCDGF反義核酸載體對高度惡性人卵巢癌細(xì)胞增殖、侵襲能力的抑制效應(yīng)及相關(guān)機(jī)制的研究.目的:觀察PCDGF反義核酸載體對高度惡性人卵巢癌細(xì)胞株Sw626、A2780生物學(xué)行為的抑制效應(yīng),并初步探討其相關(guān)機(jī)制.方法:MTT實(shí)驗(yàn)檢測增殖能力的變化,Boyden小室體外侵襲實(shí)驗(yàn)測定侵襲能力.并應(yīng)用Western blot技術(shù)檢測轉(zhuǎn)染前后CyclinD1、CDK4蛋白表達(dá)的變化,RT-PCR和明膠酶譜法分析MMP-2表達(dá)和活性的改變.結(jié)論:PC