PCDGF反義核酸載體對卵巢癌細胞的抑制效應及相關機制研究.pdf

1、第一部分:卵巢癌細胞PCDGF表達與其增殖、侵襲能力相關性的研究.目的:研究人卵巢癌細胞PCDGF的表達,探討其與卵巢癌惡性表型的關系.方法:應用半定量RT-PCR和Western blot分別檢測3株卵巢癌細胞中PCDGF mRNA和蛋白表達水平.單層細胞增殖實驗測定3株卵巢癌細胞的增殖能力;Boyden小室體外侵襲實驗測定不同細胞株的侵襲能力.結論:3株卵巢癌細胞PCDGF mRNA和蛋白表達水平與其增殖、侵襲能力呈正相關(前者r<

2、,1>=0.97,r<,2>=0.89,后者r<,1>=0.85,r<,2>=0.84),提示PCDGF在卵巢癌發(fā)生演進中可能作為獨立因素起多種作用,有望成為治療的新靶點.第二部分:PCDGF反義RNA真核表達載體的構建與轉染.目的:特異性封閉高度惡性人卵巢癌細胞株Sw626、A2780中PCDGF的表達,并觀察其對增殖能力的抑制效應.方法:RT-PCR技術擴增PCDGF基因cDNA保守序列,經pGEM-T Easy載體克隆后雙酶切,反

3、向插入哺乳動物真核表達載體pcDNA3.1(+)中構建反義PCDGF核酸載體.并通過脂質體法轉染人卵巢癌細胞株Sw626、A2780,應用RT-PCR和Western blot技術檢測轉染前后PCDGF mRNA和蛋白的表達.結論:PCDGF反義核酸在高度惡性人卵巢癌細胞株Sw626及A2780中發(fā)揮了特異性封閉作用.為進一步研究PCDGF的分子生物學特性及致瘤機理及今后利用反義PCDGF核酸載體治療卵巢癌提供實驗和理論模型.第三部分:

4、PCDGF反義核酸載體對高度惡性人卵巢癌細胞增殖、侵襲能力的抑制效應及相關機制的研究.目的:觀察PCDGF反義核酸載體對高度惡性人卵巢癌細胞株Sw626、A2780生物學行為的抑制效應,并初步探討其相關機制.方法:MTT實驗檢測增殖能力的變化,Boyden小室體外侵襲實驗測定侵襲能力.并應用Western blot技術檢測轉染前后CyclinD1、CDK4蛋白表達的變化,RT-PCR和明膠酶譜法分析MMP-2表達和活性的改變.結論:PC