石上柏提取物抑制卵巢癌細(xì)胞的研究.pdf

1、目的:
　　石上柏是我國較為常見的中藥材，具有抗腫瘤作用，常用于鼻咽癌、胃癌和肝癌等的治療;但對(duì)卵巢癌是否具有防治作用鮮見報(bào)道。本研究利用三種不同極性試劑從中草藥石上柏中分離活性成分，觀察其對(duì)體外培養(yǎng)的卵巢癌OVCAR-3細(xì)胞的抑制作用，觀察對(duì)OVCAR-3細(xì)胞的侵襲能力和對(duì)EGFR蛋白表達(dá)的影響;為從石上柏中挖掘出治療卵巢癌的活性物質(zhì)提供一定的理論基礎(chǔ)。
　　方法:
　　1 干燥的石上柏粉碎后高溫下經(jīng)乙醇浸取濃縮得到

2、膏狀物，膏狀物采用不同極性試劑石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取活性成分。
　　2 通過細(xì)胞毒實(shí)驗(yàn)檢測(cè)提取物對(duì)細(xì)胞的抑制效果，在細(xì)胞結(jié)合AnnexinⅤ-FITC和PI后用流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡，用透射電鏡觀察細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)，通過細(xì)胞在Transwell板中穿透基質(zhì)實(shí)驗(yàn)檢測(cè)提取物對(duì)OVCAR-3細(xì)胞侵襲能力的影響，通過特異性抗體的結(jié)合與免疫熒光技術(shù)檢測(cè)提取物對(duì)OVCAR-3細(xì)胞中EGFR蛋白表達(dá)的影響。
　　結(jié)果:
　　1

3、從石上柏中成功得到三種萃取成分。
　　250μg/mL及以上的石油醚和乙酸乙酯提取物作用48小時(shí)及以后可以顯著降低培養(yǎng)細(xì)胞OD490的值，即對(duì)卵巢癌OVCAR-3細(xì)胞具有較好的抑制生長、促進(jìn)死亡的作用;在作用48h時(shí)，100μg/mL及以上的石油醚提取物效果明顯強(qiáng)于乙酸乙酯提取物;二者的抑制作用具有時(shí)效和量效效應(yīng)，隨著時(shí)間的增加和濃度的增大，抑制作用也在加強(qiáng)。但是4個(gè)濃度的正丁醇提取物在3個(gè)時(shí)間點(diǎn)對(duì)細(xì)胞的抑制作用都很微弱，明顯弱于

4、其它
　　2 種提取物。石油醚提取物能破壞OVCAR-3的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)，使內(nèi)質(zhì)網(wǎng)發(fā)生腫脹空泡化;乙酸乙酯提取物能破壞OVCAR-3的線粒體和細(xì)胞核，使線粒體的嵴解體消失，降解細(xì)胞核核膜，破壞細(xì)胞核核仁。
　　3 三種提取物均能減少在單位面積內(nèi)OVCAR-3細(xì)胞穿透Matrigel基質(zhì)膠的數(shù)量，石油醚提取物的作用最為強(qiáng)烈，乙酸乙酯提取物次之，正丁醇提取物最弱。
　　4 石上柏的石油醚和乙酸乙酯提取物均降低了OVCAR-3細(xì)胞膜

5、上綠色熒光的平均強(qiáng)度值，即使EGFR蛋白的表達(dá)下降了;石油醚提取物的作用明顯強(qiáng)于乙酸乙酯提取物。
　　結(jié)論:
　　1 石上柏中可以分離出抑制卵巢癌OVCAR-3細(xì)胞生長的活性成分。
　　2 不同的成分對(duì)細(xì)胞有不同的破壞靶點(diǎn)，石油醚提取物可以破壞細(xì)胞的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)，而乙酸乙酯提取物可以破壞細(xì)胞的線粒體和細(xì)胞核結(jié)構(gòu);這兩種提取物均能下調(diào)OVCAR-3細(xì)胞中EGFR蛋白的表達(dá)，也能有效降低細(xì)胞的侵襲能力。
　　3 正丁醇提取