大鯢蛙病毒感染大鯢的組織嗜性、病理?yè)p傷及對(duì)MHC類(lèi)基因表達(dá)量影響的研究.pdf

1、為研究大鯢蛙病毒(CGSRV)感染大鯢的組織嗜性、動(dòng)態(tài)病理?yè)p傷及對(duì)MHC基因表達(dá)量的影響，以1.0×106.5TCID50ml-1濃度的CGSRV腹腔注射感染大鯢（體重280.3±20.2g，體長(zhǎng)33.9±2.3cm），在感染的0d、3d、5d、7d、9d、13d、16d隨機(jī)剖殺3尾，采取肝、腎、脾、肺、腸、皮膚肌肉、腦、心和胃等組織，石蠟切片和HE染色對(duì)CGSRV感染大鯢的病理?yè)p傷過(guò)程進(jìn)行觀察，qPCR技術(shù)對(duì)病毒的組織嗜性及動(dòng)態(tài)定量分

2、布進(jìn)行研究。結(jié)果顯示感染大鯢的臨床特征為體表黏液分泌增多，食欲下降甚至廢絕，四肢與頭部腫脹，皮膚肌肉出血、潰爛等。剖檢發(fā)現(xiàn)，感染后3d肝、脾、腎腫大;7-9d出現(xiàn)腹水，胃腸道空虛，肺出血，脾局灶性壞死;13-16d肝腫大、淤血，呈花斑狀，脾多灶性壞死，腎腫大、點(diǎn)狀出血，胃腸道內(nèi)充滿(mǎn)淡黃色粘稠物。病理組織學(xué)上，CGSRV感染導(dǎo)致大鯢多組織、器官損傷，其中肝、脾、腎和皮膚肌肉病變嚴(yán)重，為損傷靶器官，且在一些損傷的細(xì)胞內(nèi)見(jiàn)嗜堿性或嗜酸性包涵體

3、。感染后3d肝細(xì)胞與腎小管上皮細(xì)胞變性，腎間以及肝小葉中央靜脈周?chē)馨图?xì)胞和嗜酸性粒細(xì)胞浸潤(rùn);5-7d實(shí)質(zhì)性器官變性、壞死、炎癥加重，胃腸道呈卡他性炎。9d表皮細(xì)胞壞死、脫落，肌纖維變性、壞死。13-16d肝廣泛變性、壞死與炎癥，脾淋巴細(xì)胞數(shù)量顯著減少，腎小球滲出性-壞死性炎，皮膚肌肉呈出血性-壞死性炎和實(shí)質(zhì)性心肌炎。SYBRGreen qPCR結(jié)果顯示，整個(gè)感染進(jìn)程中各組織CGSRV含量呈上升趨勢(shì)，不同組織病毒量在7.89×102-4

4、.61×108copies/ug DNA之間，其中肺、腸、肝、脾、腎和皮膚肌肉含量高，表明CGSRV具有廣泛的組織嗜性，但肝、脾、腎、皮膚肌肉為其復(fù)制和損傷的靶器官，且病毒分布量與病理?yè)p傷呈正相關(guān)。
　　采用qPCR技術(shù)在CGSRV感染大鯢的0d、3d、5d、7d、9d、13d、16d對(duì)大鯢肝、脾、腎、腸、胃、皮膚、肺、肌肉等組織、器官中MHCⅠ和MHCⅡ類(lèi)基因的表達(dá)影響進(jìn)行了研究。結(jié)果顯示，CGSRV感染能引起所有被檢組織中MH

5、CⅠ、ⅡA和ⅡB基因表達(dá)變化，其中MHC1和MHCⅡA基因表達(dá)量高，與0d表達(dá)量差異顯著，MHCⅡB基因表達(dá)量變化較小，但上述3種MHC基因都呈先上升后降低趨勢(shì)，具有時(shí)間依賴(lài)性和組織差異性。感染后3d，肝、脾、腎、肺與腸中3種MHC基因極顯著上調(diào)(P＜0.01)，5-9d相繼上調(diào)到最大值，隨后下降。感染后5-7d，皮膚肌肉出現(xiàn)上調(diào)(P＜0.01)，達(dá)峰值后出現(xiàn)下降趨勢(shì)，且表達(dá)量豐富，直到16d基因表達(dá)量仍顯著高于其他各組織表達(dá)水平。結(jié)果