大鯢β-defensin基因的生物信息學分析和表達特性研究.pdf

1、β-defensin是一種結構穩(wěn)定，抗菌抗病毒活性強，具備多種生物學活性的小分子多肽。本研究對來自于大鯢皮膚轉錄組數(shù)據(jù)庫中的大鯢β-defensin基因進行了鑒定和結構分析;采用熒光實時定量PCR檢測了大鯢β-defensin基因在不同組織、不同發(fā)育階段以及細菌和病毒感染情況下的表達特性和變化;并對大鯢β-defensin基因進行了重組原核表達載體的構建和重組蛋白活性的檢測。獲得如下結果:
　　1.大鯢β-defensin基因全長

2、eDNA為771bp，其中5'非編碼區(qū)為90bp，3'非編碼區(qū)為531 bp，開放閱讀框150bp，共編碼49個氨基酸，編碼的蛋白質分子量為5.52 kD，等電點為9.23，在pH等于7的溶液中的電荷為5.87，無信號肽，為內(nèi)源性抗菌肽?；诎被嵝蛄械耐淳垲愱P系表明，其和兩棲動物親緣關系最近。
　　2.實時熒光定量PCR表明，大鯢在皮膚中表達量最高，且在幼體時即大量表達。細菌和病毒感染會顯著上調(diào)大鯢β-defensin基因的表

3、達，其中細菌感染后大鯢β-defensin基因在24小時達到峰值，而病毒感染后則在120小時達到峰值。
　　3.構建獲得的大鯢重組表達載體pET32a(+)-AdBD經(jīng)IPTG誘導，獲得了大鯢重組β-防御素蛋白，純化后的重組蛋白對革蘭氏陰性菌和革蘭氏陽性均有殺滅效果，其中對革蘭氏陰性菌中的溶藻弧菌、大腸桿菌和哈維氏菌最有效，最小抑菌濃度僅為19μg/mL。
　　以上結果表明大鯢-defensin基因是大鯢皮膚主要免疫效應基因