大鼠視網(wǎng)膜血管的電緊張傳導的研究.pdf

1、第一部分:大鼠視網(wǎng)膜血管的電緊張傳導
　　研究目的：在于探討視網(wǎng)膜血管各級血管之間相互的電緊張聯(lián)系,進一步了解視網(wǎng)膜血管收縮舒張的自主調(diào)節(jié)機制。選用成年Long-Evans大鼠,新鮮分離視網(wǎng)膜血管,臺盼藍染色觀察其細胞活性,玻璃電極封接血管壁層細胞,穿孔膜片鉗單記錄觀察各級血管電流-電壓(Ⅰ-Ⅴ)關(guān)系,并利用穿孔膜片鉗雙記錄觀察各級血管電緊張傳導,探討其電緊張傳導模式。
　　結(jié)果顯示:新鮮分離的視網(wǎng)膜血管可穩(wěn)定獲得,按血管管

2、腔大小、壁層細胞密度和形態(tài),可將獲得的視網(wǎng)膜血管分為第二級小動脈、第三級小動脈及毛細血管三級。各級血管的細胞的成活率為90％以上,顯微鏡下清晰可辨各級血管壁層細胞,適于膜片鉗記錄其離子變化;視網(wǎng)膜各級血管壁層細胞單一電生理記錄顯示,各級血管的靜息電位為-38±1mV(n=27),-42±1mV(n=29)和-45±1mV(n=10),經(jīng)單因素方差分析無明顯統(tǒng)計學差異(P=0.27)。當細胞膜電壓為-50mv時,各級血管的輸入電阻分別為:

3、175±19MΩ(n=27),151±9MQ(n=29)和127±15MQ(n=10),單因素方差分析無明顯統(tǒng)計學差異(P=0.58)。于壁層細胞行膜片鉗雙記錄,結(jié)果發(fā)現(xiàn),電緊張傳導沿毛細血管水平軸向最為高效,其電緊張傳導比為0.56±0.15(n=27),每100μm的衰減僅為2±2％(n=27);在第三級小動脈,其電緊張傳導比為0.27±0.09(n=22),每100μm的衰減僅為6±8％(n=22);在第二級小動脈,電緊張傳導比為

4、0.25±0.19(n=10),每100μm的衰減為6±8％(n=10)。三組間的衰減率沒有統(tǒng)計學差異。
　　研究發(fā)現(xiàn),視網(wǎng)膜血管的電緊張傳導主要通路為壁層細胞-內(nèi)皮細胞-壁層細胞,各級血管內(nèi)部的水平軸向傳導高效,尤以毛細血管傳導效率最高,傳導的衰減主要發(fā)生于壁層細胞和內(nèi)皮細胞之間,以及跨各級血管的水平軸向傳導之間。
　　第二部分:血管緊張素Ⅱ?qū)Υ笫笠暰W(wǎng)膜血管電緊張傳導的影響
　　目的：在于研究血管活性因子——血管緊張

5、素Ⅱ?qū)σ暰W(wǎng)膜血管自主調(diào)控的影響。選用成年Lonh-Evans大鼠,新鮮分離視網(wǎng)膜血管,免疫組織化學顯示血管緊張素Ⅱ1型受體在血管上的表達,利用穿孔膜片鉗單記錄觀察500nM血管緊張素Ⅱ?qū)σ暰W(wǎng)膜各級血管電生理的影響,利用鈣離子顯像觀察500nM血管緊張素Ⅱ在視網(wǎng)膜各級血管壁層細胞引起的細胞內(nèi)鈣離子的變化,并利用穿孔膜片鉗雙記錄觀察其對視網(wǎng)膜血管電緊張傳導的影響。
　　結(jié)果顯示:視網(wǎng)膜各級血管均表達血管緊張素Ⅱ1型受體,形態(tài)學分布未見

6、明顯差異。500nM血管緊張素Ⅱ引起壁層細胞非選擇性陽離子通道開放,電流產(chǎn)生主要部位為毛細血管,從-108mV至-38mV,產(chǎn)生的內(nèi)向電流明顯大于生理對照:從+12mV至+22mV,外向電流亦明顯大于對照(n=8,P＜0.0001)。然而,在第三級小動脈和第二級小動脈,500nM血管緊張素Ⅱ引起的電流變化明顯小于毛細血管的電流變化,與生理對照相比亦無統(tǒng)計學差異。500nM血管緊張素Ⅱ引起壁層細胞內(nèi)鈣離子升高的主要部位亦是毛細血管,其周細

7、胞鈣離子濃度改變最大值達325±20nM(n=81),明顯高于第三級小動脈肌細胞鈣離子濃度變化(55±3nM,n=149,P＜0.0001)和第二級小動脈平滑肌細胞鈣離子濃度變化(10±2nM,n=130,P＜0.0001)。500nM血管緊張素Ⅱ明顯抑制視網(wǎng)膜各級血管水平軸向電緊張傳導(每100μm衰減率～50％),但是對壁層細胞-內(nèi)皮細胞之間的傳導無明顯作用。
　　研究發(fā)現(xiàn):在視網(wǎng)膜血管,雖然血管緊張素Ⅱ1型受體分布于視網(wǎng)膜各