出生后早期接觸狄氏劑對(duì)小鼠神經(jīng)發(fā)育毒性研究.pdf

1、1.研究背景:
　　 狄氏劑（dieldrin）是上世紀(jì)中葉發(fā)展起來(lái)的一種有機(jī)氯殺蟲(chóng)劑。最早是由美國(guó)Julius Hyman &Company于1946年在實(shí)驗(yàn)室中合成，并于1950年作為殺蟲(chóng)劑推廣使用，具有神經(jīng)毒性。Richardson JR等研究表明，孕期母鼠經(jīng)口接觸較低劑量的狄氏劑（3mg/kg，經(jīng)口LD50為65mg/kg），能夠損害子代鼠黑質(zhì)紋狀體多巴胺能系統(tǒng)，并且增加子鼠成年后對(duì)其它神經(jīng)毒劑（如，MPTP）的易感性。

2、Hatcher JM等[3]對(duì)出生后9周（PND63）雄性小鼠腹腔注射低劑量狄氏劑（3mg/kg，1mg/kg，0.3mg/kg），能夠引起小鼠黑質(zhì)紋狀體多巴胺能系統(tǒng)的損害。而對(duì)出生后早期接觸低劑量狄氏劑的神經(jīng)發(fā)育毒性方面研究甚少。
　　 2.研究目的:觀察出生后早期狄氏劑染毒對(duì)ICR小鼠青春期和成年期神經(jīng)行為發(fā)育的影響，為探明狄氏劑的神經(jīng)發(fā)育毒性提供線索；通過(guò)檢測(cè)黑質(zhì)紋狀體膠質(zhì)纖維酸性蛋白（GFAP）的表達(dá)，來(lái)探討其可能的機(jī)制

3、。
　　 3.實(shí)驗(yàn)方案:仔鼠于出生后第三天（PND3）開(kāi)始染毒，隔天一次，共染毒六次（PND3－13）。觀察仔鼠一般生理發(fā)育情況，并在哺乳期（～PND21）、青春期（～PND58）和成年期（～PND96）進(jìn)行成組的神經(jīng)行為學(xué)功能測(cè)試，包括：洞板實(shí)驗(yàn)、曠場(chǎng)試驗(yàn)和自主活動(dòng)箱實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)小鼠自主活動(dòng)能力；平衡木實(shí)驗(yàn)和抓繩實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)小鼠感覺(jué)運(yùn)動(dòng)能力；曠場(chǎng)試驗(yàn)和黑白巷實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)小鼠評(píng)價(jià)小鼠的焦慮情緒；Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)小鼠空間學(xué)習(xí)記憶能力

4、。
　　 分別于PND36和PND98剖殺一批動(dòng)物，分離黑質(zhì)紋狀體，用Western blot檢測(cè)黑質(zhì)紋狀體膠質(zhì)纖維酸性蛋白（GFAP）的表達(dá)情況，探討狄氏劑神經(jīng)發(fā)育毒性的可能機(jī)制。
　　 4.結(jié)果:
　　 仔鼠出生后早期接觸不同劑量狄氏劑（20μg/kg，2μg/kg，0.2μg/kg），沒(méi)有引起其體重、一般軀體狀況（如，毛色光潔度、活力、步態(tài)、分泌物、眼外觀、神態(tài)等）和一般生理發(fā)育指標(biāo)（如，耳廓分離、開(kāi)眼、牙

5、萌出、全身絨毛等）的改變，表明本研究所選用劑量不會(huì)對(duì)仔鼠產(chǎn)生明顯毒性，其它結(jié)果發(fā)現(xiàn)：
　　 （1）狄氏劑染毒影響小鼠生殖系統(tǒng)的發(fā)育，與對(duì)照組相比，睪丸下降時(shí)間延遲（F=5.142，r=0.531，P<0.05），同時(shí)陰道開(kāi)口時(shí)間提前（F=3.888，r=－0.466，P<0.05）；斷乳前神經(jīng)行為發(fā)育除負(fù)趨地性達(dá)標(biāo)時(shí)間延遲外，其余行為學(xué)指標(biāo)在各組間均無(wú)差異；
　　 （2）青春期和成年期的洞板實(shí)驗(yàn)、自主活動(dòng)箱實(shí)驗(yàn)、平衡木實(shí)

6、驗(yàn)、抓繩實(shí)驗(yàn)、黑白巷實(shí)驗(yàn)和曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)中各指標(biāo)在同期各組間差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；
　　 （3）Morris水迷宮定位航行實(shí)驗(yàn)中的登臺(tái)潛伏期和空間探索實(shí)驗(yàn)中的游泳總路程在各組小鼠之間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；青春期Morris水迷宮空間探索實(shí)驗(yàn)中，定位航行結(jié)束后和次日的兩次穿越平臺(tái)位置次數(shù)與對(duì)照組相比，沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；而成年期Morris水迷宮空間探索實(shí)驗(yàn)中，定位航行結(jié)束后和次日的兩次穿越平臺(tái)位置次數(shù)與對(duì)照組相比，高劑量組在60s內(nèi)穿越平臺(tái)次數(shù)均減

7、少（P<0.05）；
　　 （4）Western blotting檢測(cè)發(fā)現(xiàn)：早期接觸狄氏劑可造成青春期和成年期小鼠黑質(zhì)紋狀體GFAP蛋白表達(dá)增高（p<0.05），且這種改變有隨年齡增長(zhǎng)而加重的趨勢(shì)。
　　 5.結(jié)論:
　　 出生后早期有限次數(shù)接觸狄氏劑在染毒期間會(huì)影響仔鼠軀體感覺(jué)運(yùn)動(dòng)功能發(fā)育，至青年期得以恢復(fù)；出生后早期接觸狄氏劑，會(huì)對(duì)青春期和成年期小鼠空間記憶能力產(chǎn)生明顯影響；出生后早期接觸狄氏劑會(huì)引起青春期黑