聚焦超聲阻斷宮頸高危型HPV感染的機(jī)制與初步臨床研究.pdf

1、宮頸癌是女性生殖系統(tǒng)常見的惡性腫瘤。高危型人乳頭狀瘤病毒(High Risk Human papiloman virus,HR-HPV)持續(xù)感染是宮頸上皮內(nèi)瘤變及宮頸癌發(fā)生的始動因素。阻斷HR-HPV的持續(xù)感染是防治宮頸癌的重要途徑。但目前對于宮頸HR-HPV的持續(xù)感染尚沒有有效的治療方法。聚焦超聲作為治療宮頸疾病的新技術(shù),其抑制HR-HPV持續(xù)感染的作用已經(jīng)得到初步證實(shí),本課題擬通過研究聚焦超聲對宮頸癌Caski細(xì)胞存活率和細(xì)胞形態(tài)的

2、影響,以及對Caski細(xì)胞中HPVE6、E7基因表達(dá)的影響,探討聚焦超聲阻斷宮頸HPV感染的機(jī)制,并通過臨床對照研究,進(jìn)一步探討聚焦超聲用于治療宮頸HR-HPV持續(xù)感染的有效性。
　　 一聚焦超聲對宮頸癌Caski細(xì)胞存活率和細(xì)胞形態(tài)的影響
　　 采用聚焦超聲(輻照參數(shù):10.2MHz,3.5W,焦距4mm)輻照宮頸癌Caski細(xì)胞,輻照時間分別為10、20、30、40、50 S。并以未輻照的Caski細(xì)胞作為對照組,輻

3、照后于孵育箱內(nèi)孵育24小時,顯微鏡下觀察各組細(xì)胞形態(tài)采用四甲基偶氮噻唑藍(lán)(Methyl ThazolylTetrazolium,MTT)檢測其吸光度,觀察聚焦超聲輻照不同時間后對細(xì)胞存活率的影響。
　　 結(jié)果:(1)聚焦超聲以不同的時間輻照宮頸癌Caski細(xì)胞,培養(yǎng)24小時后,光鏡下觀察顯示隨著輻照時間的延長,長梭型的Caski細(xì)胞增大、變圓,逐漸失去正常形態(tài),同時細(xì)胞核增大,核質(zhì)明顯。(2)MTI法檢測結(jié)果顯示:聚焦超聲輻照3

4、0S,24小時后細(xì)胞存活率為55.7％。輻照50S,24小時后細(xì)胞存活率為26.1％。隨著輻照時間的延長,24小時后細(xì)胞存活率逐漸減低,且其差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　 結(jié)論:聚焦超聲輻照宮頸癌Caski細(xì)胞時,輻照時間越長,細(xì)胞形態(tài)失常越顯著,細(xì)胞存活率越低。
　　 二聚焦超聲對宮頸癌Caski細(xì)胞中HPV16E6、E7基因表達(dá)的影響。
　　 聚焦超聲輻照Caski細(xì)胞,時間分別為30S、50S,并

5、以未輻照組作為對照。各組細(xì)胞于溫箱內(nèi)孵育24小時后,Trizol試劑盒提取各組細(xì)胞中的rna,用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(Reversetrans-cription-Polymerase-Chain-Reaction,RT-PCR)半定量檢測聚焦超聲對HPV16 E6、E7基因表達(dá)的影響。PCR產(chǎn)物分析:擴(kuò)增產(chǎn)物于1％瓊脂糖凝膠電泳,紫外燈下觀察并照相,密度掃描分析儀測定光密度(optical density,OD)值。
　　 結(jié)果:

6、聚焦超聲輻照30秒后,Caski細(xì)胞中HPVE6、E7基因表達(dá)較對照組低,輻照50秒后其表達(dá)低于30秒。其條帶與內(nèi)參條帶的積分光密度比值差異有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)
　　 結(jié)論:聚焦超聲輻照后Caski細(xì)胞內(nèi)HPV病毒中E6、E7基因表達(dá)減弱,其表達(dá)與輻照時間成負(fù)相關(guān)。
　　 三聚焦超聲治療高危型宮頸HPV持續(xù)感染的初步臨床研究
　　 將臨床確診的宮頸高危型HPV持續(xù)感染患者90例,隨機(jī)分為3組(每組3

7、0例),分別給與聚焦超聲治療、干擾素治療及假輻照處理,于治療后3個月,6個月采用二代雜交捕獲試驗(yàn)(Hybrid Capture2,HC2)檢測各組的HPV的轉(zhuǎn)陰率,緩解率及無效率。
　　 結(jié)果:治療后3個月,聚焦超聲治療組轉(zhuǎn)陰率為53.3％；干擾素治療組轉(zhuǎn)陰率48.3％。假照組轉(zhuǎn)陰率為31.0％(P<0.05)。治療后6個月,聚焦超聲治療組轉(zhuǎn)陰率為82.8％,干擾素治療組轉(zhuǎn)陰率79.3％,對照組轉(zhuǎn)陰率53.6％,與假照組對比,聚