SEN病毒檢測(cè)方法和致病性研究.pdf

1、【目的】建立SENV的聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)、斑點(diǎn)雜交和抗原抗體檢測(cè)方法,在此基礎(chǔ)上檢測(cè)SENV-D和SENV-H在武漢地區(qū)各種不同人群中的流行情況,結(jié)合臨床資料,進(jìn)一步驗(yàn)證SENV的傳播途徑,初步分析SENV的致病性及重疊感染時(shí)對(duì)拉米夫定抗HBV療效的影響,以探討SENV感染與病毒性肝炎之間的關(guān)系.【方法】針對(duì)SENV ORF1部分區(qū)域設(shè)計(jì)、合成引物,采用套式聚合酶鏈反應(yīng)(nested-PCR)擴(kuò)增SENV-D和SENV-H亞型.擴(kuò)增

2、SENV-D ORF2基因,克隆至相應(yīng)的質(zhì)粒中,以地高辛DNA標(biāo)記試劑盒制備SENV ORF2探針,并進(jìn)行斑點(diǎn)雜交檢測(cè).比較針對(duì)SENV ORF2和ORF1不同區(qū)域設(shè)計(jì)引物的PCR方法和斑點(diǎn)雜交方法在SENV檢測(cè)方面的差異.對(duì)采用SENV ORF1引物、SENV ORF2引物擴(kuò)增的陽(yáng)性產(chǎn)物測(cè)序和Blastn序列比對(duì),用clutal X和mega2軟件分析SENV的系統(tǒng)進(jìn)化情況.轉(zhuǎn)化攜帶SENV ORF2基因的重組原核表達(dá)載體至BDPS菌

3、中,以IPTG誘導(dǎo)表達(dá)后進(jìn)行SDS-PAGE,用混合血清對(duì)上述表達(dá)蛋白進(jìn)行免疫印跡分析.【結(jié)論】SENV ORF1套式引物適用于對(duì)SENV感染率的PCR檢測(cè),不同引物擴(kuò)增和不同模板提取方法可能是影響SENV DNA檢出率重要因素;以地高辛標(biāo)記的探針具有SENV-D特異性,斑點(diǎn)雜交檢測(cè)SENV感染陽(yáng)性率低于PCR,而特異性較好;SENV ORF2原核表達(dá)蛋白具有一定的抗原活性,可用于SENV IgG的檢測(cè).武漢地區(qū)存在SENV的感染,血漿