鵝圓環(huán)病毒實(shí)驗(yàn)感染及其致病性研究.pdf

1、鵝圓環(huán)病毒(Goose Circovirus, GoCV)是圓環(huán)病毒科圓環(huán)病毒屬成員。與其他圓環(huán)病毒一樣,鵝圓環(huán)病毒常潛伏感染。但往往由于它侵染淋巴器官,引起免疫力下降,導(dǎo)致動(dòng)物對多種條件性病原二次感染的易感性增加。迄今為止,有關(guān)鵝圓環(huán)病毒致病性的報(bào)道都是有關(guān)自然感染病例的,有必要進(jìn)行人工感染試驗(yàn),探明其致病性。本實(shí)驗(yàn)采用PCR鑒定為GoCV陽性的自然感染法氏囊組織樣品,制備組織懸液,用于人工感染試驗(yàn)。40只GoCV陰性鵝隨機(jī)分為感染組

2、(30只)和陰性對照組(10只),感染組鵝于3周齡以點(diǎn)眼滴鼻口服的方式人工接種GoCV陽性法氏囊組織樣品制備的懸液,陰性組鵝接種生理鹽水,并嚴(yán)格隔離飼養(yǎng)。試驗(yàn)鵝每周進(jìn)行臨床癥狀觀察和稱重,并采血分離血清。感染組鵝于接種后7,14,21,28,35和49天各撲殺5只,對照組于接種后28和49天各撲殺5只,觀察大體病理學(xué)變化,并采集法氏囊、脾臟、胸腺、肝臟、肺臟、腎臟、心臟、十二指腸、空腸、回腸、腦、胰腺等樣品,進(jìn)行GoCV核酸的PCR檢測

3、和定量,制備石蠟切片進(jìn)行組織病理學(xué)觀察、免疫組織化學(xué)及細(xì)胞凋亡檢測。臨床癥狀觀察發(fā)現(xiàn)感染組鵝有3例出現(xiàn)羽毛病變,絕大部分鵝于接種后17-30天出現(xiàn)腹瀉,試驗(yàn)鵝生長速度差異明顯。大體病理學(xué)見心內(nèi)膜及心外膜出血、肝臟出血、胸腺腫大出血,個(gè)別見法氏囊出血,脾臟腫大。組織病理學(xué)見法氏囊淋巴細(xì)胞數(shù)量下降、組織細(xì)胞增多,肺臟、肝臟、腎臟及胰腺炎性浸潤。普通PCR檢測結(jié)果顯示,血清中僅感染后14天檢出GoCV核酸,法氏囊、胸腺、脾臟、肝臟及十二指腸中

4、均可檢測到核酸,但不同組織不同感染時(shí)間陽性比例不同。普通PCR陽性樣品進(jìn)一步進(jìn)行real-time PCR定量檢測,結(jié)果血清中病毒量相對較低(~103copies/μl),法氏囊中相對最高(~105-6 copies/mg),其他組織次之(~103-5 copies/mg)。免疫組化方法檢測了PCR陽性組織樣品中GoCV抗原的分布情況,結(jié)果僅見3個(gè)法氏囊樣品出現(xiàn)陽性信號(3/8),推測可能與建立的方法靈敏度較低有關(guān)。陽性法氏囊樣品中皮質(zhì)

5、及髓質(zhì)均可見免疫組化陽性細(xì)胞,GoCV陽性顆粒主要出現(xiàn)在感染細(xì)胞的胞漿中,少數(shù)存在于胞核內(nèi)。所有實(shí)驗(yàn)鵝的法氏囊樣品采用TUNEL法進(jìn)行了細(xì)胞凋亡的原位檢測。結(jié)果法氏囊皮質(zhì)、髓質(zhì)及囊上皮細(xì)胞均出現(xiàn)凋亡細(xì)胞,陰性組鵝細(xì)胞凋亡指數(shù)相對較低,陽性信號相對弱,感染后14天陽性組鵝法氏囊細(xì)胞凋亡指數(shù)增高,感染后21天達(dá)最大值,并一直維持至實(shí)驗(yàn)結(jié)束(感染后49天)。感染后28及49天,感染組鵝細(xì)胞凋亡與陰性組差異顯著(p＜0.05)。37只GoCV|

6、陰性鵝隨機(jī)分成感染免疫組、非感染的免疫對照組和非感染的陰性對照組。感染免疫組共26只鵝,分別于3周齡接種GoCV陽性法氏囊制備的病毒組織懸液,其中6只于接種同日進(jìn)行免疫,6只、7只、7只分別于接種后1、2、3周進(jìn)行免疫。非感染的免疫對照組5只接種生理鹽水,于接種的同日免疫;非感染的陰性對照組僅接種生理鹽水,不進(jìn)行免疫。非感染的2組鵝與感染組間嚴(yán)格隔離飼養(yǎng)。免疫的疫苗包括禽流感滅活油佐劑疫苗和新城疫弱毒活疫苗。每周采集血清,測定相應(yīng)的抗體