卵巢癌CD47表達水平及靶向治療的體外研究.pdf

1、目的:①明確CD47在卵巢癌中的表達情況，分析其與臨床病理參數的關系，為CD47單克隆抗體應用于卵巢癌的靶向治療提供理論依據。②探討CD47單克隆抗體對巨噬細胞吞噬卵巢癌細胞的作用，為CD47單克隆抗體治療卵巢癌提供實驗依據。③初步研究ALDH+/ALDH-卵巢癌細胞CD47的表達情況，為后續(xù)針對卵巢癌干細胞的研究提供實驗基礎。
　　 方法:①應用流式細胞術檢測CD47在人卵巢癌細胞系SKOV-3及正常卵巢組織細胞和卵巢癌組織細

2、胞中的表達情況，分析其與卵巢癌患者臨床病理參數的關系，明確其在卵巢癌的臨床意義。②通過細胞形態(tài)學、CD14免疫表型、雞紅細胞吞噬實驗分析小鼠巨噬細胞、人外周血巨噬細胞和人臍血巨噬細胞三種巨噬細胞活性的情況。③應用細胞功能學實驗通過免疫熒光顯微鏡觀察CD47單克隆抗體對巨噬細胞吞噬卵巢癌細胞和SKOV-3細胞的作用。④應用流式細胞術檢測ALDH+卵巢癌干細胞的比例，并分析卵巢癌ALDH+/ALDH-細胞CD47的表達情況。
　　

3、結果:①CD47表達水平于人卵巢癌細胞系SKOV-3（CD47平均熒光強度值47.44±4.55）和卵巢癌細胞中（CD47平均熒光強度值17.00±10.93）均明顯高于正常卵巢組織細胞（CD47平均熒光強度值3.03±1.14），差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05);并且其表達水平與卵巢癌患者年齡、病理類型無明顯聯系，差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)，而與疾病的臨床分期、病理分化程度具有明顯聯系，差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。②三

4、種來源的巨噬細胞中人臍血巨噬細胞較小鼠巨噬細胞及人外周血巨噬細胞相比，其培養(yǎng)條件復雜，變量因素較多，并且吞噬功能明顯對比小鼠巨噬細胞及人外周血巨噬細胞較弱。因此后續(xù)的細胞功能實驗應用小鼠巨噬細胞及人外周血巨噬細胞進行體外實驗。③巨噬細胞與卵巢癌腫瘤細胞共培養(yǎng)的體外細胞功能學實驗表明CD47單克隆抗體可明顯促進巨噬細胞對卵巢癌腫瘤細胞的吞噬作用，差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，而同抗體本身的作用及HLA機制介導的免疫作用無明顯關系(P

5、＞0.05);隨著應用CD47單克隆抗體濃度的改變，其吞噬指數呈明顯的濃度依賴性，隨抗體濃度的增加，吞噬作用加強，差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，當抗體濃度于10μg/mL時表現為吞噬效率最大，吞噬指數0.35（±0.09），這可能與抗體濃度達到飽和的狀態(tài)有關。④流式細胞術分析的7例卵巢癌組織細胞標本中ALDH+卵巢癌干細胞的比率很少（1.65±1.27）％，ALDH+細胞的CD47表達水平（19.85±3.80）明顯高于ALDH-