牡丹胚離體植株再生及組培中褐化問題的研究.pdf

1、牡丹為世界名花，中國(guó)原產(chǎn)，其花朵碩大，多姿多彩，是中國(guó)的傳統(tǒng)名花，有著悠久的栽培歷史，被廣泛應(yīng)用于園林綠化和環(huán)境美化中。由于牡丹上胚軸具有休眠的特性，使得常規(guī)雜交育種周期較長(zhǎng)，所以牡丹的育種工作也受到了很大的限制。牡丹次生代謝旺盛，組織培養(yǎng)過程中80％以上的材料都會(huì)產(chǎn)生褐色物質(zhì)，褐變已經(jīng)成為影響牡丹組織培養(yǎng)成功的重要因素。 本研究以西北農(nóng)林科技大學(xué)牡丹園的牡丹為材料，進(jìn)行了牡丹離體胚培養(yǎng)及組織培養(yǎng)中有關(guān)褐化問題的研究，獲得了以下

2、主要結(jié)論： 1.初代培養(yǎng)時(shí)牡丹離體胚需要較高的空氣濕度，牡丹近成熟胚離體培養(yǎng)時(shí)不需要較高的滲透壓，3％的蔗糖濃度即可。VC不適合用于牡丹離體胚的培養(yǎng)，150mg/LVC會(huì)使離體胚致死。1g/L的PVP可以用來防止褐化，400mg/LCH加入培養(yǎng)基能促進(jìn)胚茁壯生長(zhǎng)。剛采收的種子具有較高的活力，適合以子葉作為外植體進(jìn)行離體再生體系的建立。冷藏有利于打破牡丹的上胚軸休眠，在4℃下冷藏兩個(gè)月，可以由胚直接誘導(dǎo)生苗。0.5mg/L6-BA

3、，1.0mg/L GA3可以打破牡丹上胚軸休眠。 對(duì)于牡丹離體胚的培養(yǎng)可以采用兩條途徑，其一是先用6-BA打破上胚軸的休眠，使子葉萌發(fā)，長(zhǎng)出真葉，然后進(jìn)行根的誘導(dǎo)，2.0mg/L的IBA對(duì)根的誘導(dǎo)率較高，為80.5％。其二是先在MS培養(yǎng)基上培養(yǎng)，等胚根長(zhǎng)到2cm左右時(shí)，加入激素6-BA、GA3以打破胚的休眠，使子葉擴(kuò)大，長(zhǎng)出真葉。繼代培養(yǎng)適宜的培養(yǎng)基為MS+6-BA 1.0mg/L+GA31.0mg/L+AC O.5％和MS+6

4、-BA 0.5mG/L+GA3 1.0mg/L+PVP 0.1％。 2.WPM+6-BA 1.0mG/L+NAA 1.0mg/L+2,4-D 1.0mg/L+PVP 0.1％為較適合的愈傷組織誘導(dǎo)的培養(yǎng)基。在愈傷組織誘導(dǎo)過程中，子葉比下胚軸更適合做外植體，由子葉誘導(dǎo)的愈傷組織均勻一致，淡綠色有光澤，質(zhì)量較高。適合分化芽的培養(yǎng)基為WPM+2,4-D1.0m g/L+6-BA 2.0mg/L+NAA 0.5mGL+KT 0.1mg/

5、L+PVP 0.1％，芽的分化率為24.6％。生根誘導(dǎo)培養(yǎng)基為1/2MS+IBA 2.0mg/L,誘導(dǎo)率為8.9％。 在誘導(dǎo)芽分化過程中產(chǎn)生了較多的葉狀體和不定根，推斷直接器官發(fā)生的增殖方式可能更適合子葉外植體的離體培養(yǎng)。 3.不同品種牡丹同種外植體間褐化差別較大，同一品種間不同的外植體褐化的差異也較大，所以在組織培養(yǎng)過程中應(yīng)有選擇的進(jìn)行，選擇褐化率較低的品種。供試驗(yàn)的8品種中，金陽(yáng)、金閣、賽雪塔褐化程度較輕，適合做外植