原發(fā)性肝癌的生物病因?qū)W研究.pdf

1、第一部分乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒感染與原發(fā)性肝癌的相關(guān)性研究 目的 研究乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒感染在原發(fā)性肝癌形成中的生物學(xué)行為。 方法 采用免疫組織化學(xué)方法對(duì)肝癌組織及癌旁組織中的HBsAg和HCV抗原表達(dá)進(jìn)行了標(biāo)記和分析，同時(shí)對(duì)其癌旁肝組織進(jìn)行肝組織纖維化分期，檢測(cè)其血清肝纖維化標(biāo)志物水平、甲胎蛋白水平、外周血T細(xì)胞亞群及NK活性，并研究它們的相關(guān)性。 結(jié)果 100例肝癌患者血清

2、肝纖維化標(biāo)志物水平、甲胎蛋白水平在HBV、HCV混合感染組中最高，單獨(dú)HBV、HCV感染組次之，無(wú)病毒感染組最低，肝癌組織、癌旁組織中HBsAg和HCV抗原表達(dá)與HA、LN、C-Ⅳ、甲胎蛋白水平成正相關(guān)，肝癌患者出現(xiàn)免疫紊亂與乙肝、丙肝病毒感染有關(guān)。 結(jié)論 肝癌患者的乙肝、丙肝病毒感染背景直接影響肝癌患者的血清肝纖維化標(biāo)志物水平、肝纖維化分期，并影響肝癌患者免疫功能及甲胎球蛋白水平。一方面病毒的感染是肝癌發(fā)生的原因，另一

3、方面長(zhǎng)期的病毒血癥會(huì)加重肝臟組織病變，加強(qiáng)抗病毒治療，減少肝組織病毒抗原表達(dá)，對(duì)肝癌的防治有重要意義。 第二部分原發(fā)性肝癌組織中螺桿菌感染的生物病因?qū)W研究 目的 通過(guò)細(xì)菌培養(yǎng)、電子顯微術(shù)、分子生物學(xué)技術(shù)探討螺桿菌感染與人類(lèi)原發(fā)性肝癌(HCC)的相關(guān)性，為肝癌的致病機(jī)理和防治尋找有價(jià)值的實(shí)驗(yàn)和理論依據(jù)。 方法 1、選取34例HCC患者的肝癌組織為實(shí)驗(yàn)組，22例其他肝病患者肝組織和25例胃癌患者胃癌組

4、織、15例結(jié)腸癌、15例子宮肌瘤作對(duì)照組。采用聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)檢測(cè)螺桿菌屬16S rRNA基因、相關(guān)功能基因cagA和vacA，16SrRNA的擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)Southern雜交確認(rèn)，并將PCR產(chǎn)物進(jìn)行測(cè)序及同源性比較。 2、用螺桿菌屬特異探針、Hp、Hh和Hf型特異性16S rRNA-cDNA探針對(duì)各組制成的冰凍切片標(biāo)本進(jìn)行原位雜交實(shí)驗(yàn)。 3、電鏡觀察癌組織中細(xì)菌形態(tài)、位置。 4、應(yīng)用哥倫比亞培養(yǎng)基分離培養(yǎng)癌

5、組織中的螺桿菌，并對(duì)培養(yǎng)陽(yáng)性標(biāo)本進(jìn)行染色、電鏡觀察和尿素酶檢測(cè)鑒定，并進(jìn)一步檢測(cè)16S rRNA、vacA和cagA基因。通過(guò)以上方法綜合評(píng)價(jià)螺桿菌感染與HCC的相關(guān)性。 結(jié)果 1、34例原發(fā)性肝癌標(biāo)本中有22例檢出螺桿菌屬16s rRNA基因，陽(yáng)性率為64.71％；25例胃癌標(biāo)本有18例檢出螺桿菌16s rRNA，陽(yáng)性率為72％。其他對(duì)照組未擴(kuò)增出16S rRNA基因。 2、16S rRNA PCR產(chǎn)物經(jīng)Sou

6、thern雜交證實(shí)為Up。序列測(cè)定表明，肝癌和胃癌組織中的螺桿菌16S rRNA序列與Hp序列有97.80％的同源性。 3、肝癌組相關(guān)功能基因有3例caga基因陽(yáng)性，胃癌組有2例cagA基因陽(yáng)性，均未擴(kuò)增出vacA基因。 4、原位雜交檢測(cè)螺桿菌16S rRNA-mRNA陽(yáng)性者均為Up，其中肝癌組有22例，胃癌組有17例，結(jié)腸癌組1例，前兩組對(duì)比無(wú)顯著性差異(P＞0.05)，而與其他組有顯著性差異(P＜0.01)。