北京地區(qū)流行性腮腺炎野病毒基因特征及疫苗效果評(píng)價(jià).pdf

1、流行性腮腺炎(腮腺炎)是由流行性腮腺炎病毒(mumps virus)引起的急性呼吸道傳染病，屬于我國(guó)法定的丙類(lèi)傳染病?；颊咧饕?～15歲的兒童和青少年。腮腺炎的并發(fā)癥發(fā)生率較高，腦膜炎的發(fā)生率為1％～10％，青春期后男性睪丸附睪炎發(fā)生率為25％。腮腺炎病毒只有一個(gè)血清型，但有多個(gè)基因型，腮腺炎病毒SH基因的變異程度最大，因此國(guó)際上將其作為分型依據(jù)。目前已發(fā)現(xiàn)了12個(gè)基因型，分別命名為A～L。中國(guó)特有的流行株為F基因型。腮腺炎病毒的血凝

2、素一神經(jīng)氨酸酶(HN)是病毒主要的免疫原性蛋白。不同基因型的HN蛋白抗原性不同，其特異性抗原位點(diǎn)存在差異。 本研究用Vero細(xì)胞和Vero/SLAM細(xì)胞從北京地區(qū)2004～2007年腮腺炎暴發(fā)和散發(fā)的107個(gè)病例的含漱液和尿液標(biāo)本中分離到34株陽(yáng)性分離物，經(jīng)過(guò)逆轉(zhuǎn)錄—聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)法等方法鑒定，共得到33株腮腺炎病毒，均來(lái)自于含漱液標(biāo)本。血清學(xué)檢測(cè)中，5例病毒分離陽(yáng)性病例的急性期血標(biāo)本IgM抗體檢測(cè)陰性，證實(shí)了僅用

3、IgM陽(yáng)性作為腮腺炎實(shí)驗(yàn)室確診指標(biāo)會(huì)有病例漏檢。 北京市2000年將腮腺炎疫苗列入計(jì)劃免疫，2006年開(kāi)始免費(fèi)接種麻疹、腮腺炎、風(fēng)疹(MMR)三聯(lián)疫苗，并在2006年對(duì)中小學(xué)未接種過(guò)腮腺炎疫苗的學(xué)生進(jìn)行了大規(guī)模的MMR的補(bǔ)種。但大規(guī)模接種后，2007年的發(fā)病率沒(méi)有明顯下降，有免疫史的病例大幅增加。實(shí)驗(yàn)室2007年的病毒分離率和IgM抗體陽(yáng)性率都明顯低于往年。統(tǒng)計(jì)分析，病毒分離率和IgM抗體陽(yáng)性率與病例的免疫史狀況密切相關(guān)，因此提

4、出疫苗免疫效果的問(wèn)題。 用RT-PCR方法擴(kuò)增33株腮腺炎病毒SH基因316個(gè)核苷酸片段，進(jìn)行核苷酸序列測(cè)定和分析。結(jié)果33株腮腺炎病毒均屬于F基因型，疫苗株VAC—S79屬于A基因型。說(shuō)明近年來(lái)北京地區(qū)流行的優(yōu)勢(shì)株為F基因型，沒(méi)有發(fā)現(xiàn)其他基因型的野病毒流行，也沒(méi)發(fā)現(xiàn)基因型間的變異。但同源性分析發(fā)現(xiàn)，北京株與F基因型代表株氨基酸差異為4.9％，已存在到達(dá)分型臨界值(5.0％)的型內(nèi)差異。同時(shí)，北京株與上海株的核苷酸差異明顯大于蘭

5、州株，即北京株與蘭州株親緣關(guān)系更近。 在對(duì)SH蛋白氨基酸序列進(jìn)行分析時(shí)發(fā)現(xiàn)北京株的變異程度較高，部分保守的氨基酸位點(diǎn)發(fā)生了變化，8位L→F，11位T→K，23位I→N，45位Q→H\L，個(gè)別在48位L\R→P，57位L→P。提示SH蛋白結(jié)構(gòu)有可能發(fā)生變化。同時(shí)，與基因分型有關(guān)的氨基酸三聯(lián)體也出現(xiàn)變異，北京株雖都屬于F基因型，卻有6株為IIL，為D，I，K，L和部分基因型G特征；另有3株為ILL，2株為IVL。北京株與F基因型代表

6、株之間氨基酸最大差異為6個(gè)氨基酸，證明F基因型屬于變異程度高的基因型。同時(shí)發(fā)現(xiàn)部分氨基酸位點(diǎn)隨時(shí)間逐漸出現(xiàn)變異的傾向。 HN蛋白基因共計(jì)1749個(gè)核苷酸，編碼582個(gè)氨基酸，為病毒主要結(jié)構(gòu)抗原，保守性高。本研究陽(yáng)性分離株HN基因測(cè)序成功的為31株。轉(zhuǎn)換為氨基酸序列后，分析它們的同源性發(fā)現(xiàn)不同分離株之間的差異為0～2.3％。流行株與Jeryl—Lynn疫苗株之間的差異為4.2～5.3％，差異較大。做北京地區(qū)流行株與疫苗株的親緣關(guān)

7、系進(jìn)化樹(shù)(圖18)，發(fā)現(xiàn)流行株與Urabe株屬于同一分支，而JL2、JL5和Rubini屬于另一分支。 所有北京地區(qū)流行株在HN蛋白基因具有降低交叉中和能力的2個(gè)位點(diǎn)上與疫苗株為不同的氨基酸。354位：流行株為Q(谷酰胺)，疫苗株為P(脯氨酸)。356位：流行株為D(天冬氨酸)，疫苗株為E(谷氨酸)。在329～340位置也有個(gè)別流行株存在差異，如：334位V→F，338位R→C/R→K。HN蛋白上有9個(gè)潛在的N—糖基化位點(diǎn)，實(shí)驗(yàn)