大黃酸及大黃素對大鼠腹腔巨噬細胞P2X-,7-通道的影響.pdf

1、近年來，細胞膜上的離子通道越來越受到大家的關(guān)注。其中，許多離子通道在病理學方面起了十分關(guān)鍵的作用，許多“離子通道病”被相繼發(fā)現(xiàn)。由此，一些離子通道已經(jīng)成為了藥物研發(fā)的靶點。P2X7受體是一種ATP門控的離子通道，主要在免疫細胞中表達，參與多種免疫反應過程，并可誘發(fā)細胞凋亡和壞死。
　　 本文以大鼠腹腔巨噬細胞(PMφ)為研究對象，研究了中藥大黃的有效成分大黃酸(Rhein)和大黃素(Emodin)對胞外高濃度的三磷酸腺苷(ATP

2、)引起的細胞死亡的影響，研究了兩種藥物對P2X7受體的作用，探討了藥物的作用機制。實驗利用MTT法檢測巨噬細胞死亡。結(jié)果表明，胞外高濃度ATP作用30min可誘導巨噬細胞死亡，且呈劑量依賴性，其中5mMATP誘導死亡率可達36.3％。而這一現(xiàn)象可以被大黃酸和大黃素所抑制，并且呈現(xiàn)濃度依賴性，其半數(shù)抑制濃度(IC50)分別為：0.65μM和0.52μM。為了探討這一現(xiàn)象的機理，本實驗又利用單細胞鈣離子成像分析系統(tǒng)，檢測了大黃酸和大黃素對A

3、TP引起的巨噬細胞[Ca2+]i動力學變化的抑制作用。同時，本實驗用P2X7受體的特異性激動劑BzATP代替ATP做了相同的實驗。結(jié)果顯示，5mMATP和50μMBzATP均能誘發(fā)正常巨噬細胞[Ca2+]i迅速升高；且大黃酸和大黃素對[Ca2+]i的升高有明顯抑制作用，并且具有劑量依賴性。本實驗還利用了P2X7受體的特異性，用倒置熒光顯微鏡檢測了巨噬細胞對溴化乙錠(EB)攝取程度。發(fā)現(xiàn)5mMATP刺激10min能顯著增加巨噬細胞對EB的