大黃酸及大黃素對(duì)大鼠腹腔巨噬細(xì)胞P2X-,7-通道的影響.pdf

1、近年來(lái)，細(xì)胞膜上的離子通道越來(lái)越受到大家的關(guān)注。其中，許多離子通道在病理學(xué)方面起了十分關(guān)鍵的作用，許多“離子通道病”被相繼發(fā)現(xiàn)。由此，一些離子通道已經(jīng)成為了藥物研發(fā)的靶點(diǎn)。P2X7受體是一種ATP門(mén)控的離子通道，主要在免疫細(xì)胞中表達(dá)，參與多種免疫反應(yīng)過(guò)程，并可誘發(fā)細(xì)胞凋亡和壞死。
　　 本文以大鼠腹腔巨噬細(xì)胞(PMφ)為研究對(duì)象，研究了中藥大黃的有效成分大黃酸(Rhein)和大黃素(Emodin)對(duì)胞外高濃度的三磷酸腺苷(ATP

2、)引起的細(xì)胞死亡的影響，研究了兩種藥物對(duì)P2X7受體的作用，探討了藥物的作用機(jī)制。實(shí)驗(yàn)利用MTT法檢測(cè)巨噬細(xì)胞死亡。結(jié)果表明，胞外高濃度ATP作用30min可誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞死亡，且呈劑量依賴(lài)性，其中5mMATP誘導(dǎo)死亡率可達(dá)36.3％。而這一現(xiàn)象可以被大黃酸和大黃素所抑制，并且呈現(xiàn)濃度依賴(lài)性，其半數(shù)抑制濃度(IC50)分別為：0.65μM和0.52μM。為了探討這一現(xiàn)象的機(jī)理，本實(shí)驗(yàn)又利用單細(xì)胞鈣離子成像分析系統(tǒng)，檢測(cè)了大黃酸和大黃素對(duì)A

3、TP引起的巨噬細(xì)胞[Ca2+]i動(dòng)力學(xué)變化的抑制作用。同時(shí)，本實(shí)驗(yàn)用P2X7受體的特異性激動(dòng)劑BzATP代替ATP做了相同的實(shí)驗(yàn)。結(jié)果顯示，5mMATP和50μMBzATP均能誘發(fā)正常巨噬細(xì)胞[Ca2+]i迅速升高；且大黃酸和大黃素對(duì)[Ca2+]i的升高有明顯抑制作用，并且具有劑量依賴(lài)性。本實(shí)驗(yàn)還利用了P2X7受體的特異性，用倒置熒光顯微鏡檢測(cè)了巨噬細(xì)胞對(duì)溴化乙錠(EB)攝取程度。發(fā)現(xiàn)5mMATP刺激10min能顯著增加巨噬細(xì)胞對(duì)EB的