內(nèi)皮素轉(zhuǎn)化酶-1各亞型在大鼠主動脈縮窄所致心肌肥厚模型中的表達差異以及內(nèi)皮素轉(zhuǎn)化酶-1亞型特異性抗體的制備.pdf

1、目的：心肌肥厚是心肌工作超負(fù)荷的一種適應(yīng)性反應(yīng)，是引起心血管疾病發(fā)生率和死亡率顯著升高的獨立的危險因素。本實驗通過縮窄大鼠腹主動脈建立心肌肥厚模型，研究心肌組織內(nèi)皮素轉(zhuǎn)化酶-1(ECE-1)及其各個亞型的變化情況。并針對各個亞型特異性肽段，使用免疫多肽片斷-KLH蛋白偶聯(lián)法制備針對各亞型的多克隆抗體，并初步檢測抗體的效價和特異性。 方法：采用大鼠腹主動脈縮窄法建立心肌肥厚模型。健康SD大鼠隨機分為六組：①假手術(shù)組2周(n=8)，

2、②腹主動脈縮窄組2周，③假手術(shù)組4周(n=8)④腹主動脈縮窄組4周(n=12)，⑤假手術(shù)組6周(n=8)，⑥腹主動脈縮窄組6周(n=12)。測定血壓，血流動力學(xué)指標(biāo)，超聲心動圖以及心肌組織ANP表達量等以確定心肌肥厚模型的成功建立，RT-RCR及western法分別測量ECE-1的表達量，RT-PCR法測量四種亞型在肥厚心肌組織中的表達差異。同時測量各組心肌組織中前原內(nèi)皮素-1(RT-PCR)和內(nèi)皮素-1(ELISA)的含量，從而間接反

3、應(yīng)內(nèi)皮素轉(zhuǎn)化酶-1的活性。 人工合成針對各亞型的特異性肽段，交連到馬來酰亞胺活化的mcKLH蛋白上后與佐劑混合免疫家兔，獲得兔抗人的亞型特異性抗血清并通過ELISA法測量抗體效價及特異性。 結(jié)果：①與對照組比較，心肌肥厚組SBP、LVMI、LVSP、IVS等都顯著增高(p＜0.05)，光鏡下見心肌細(xì)胞肥大、肌纖維增粗。②心肌肥厚組心肌組織ECE-1的表達明顯增加(p＜0.01)，且呈現(xiàn)時間依賴型。③心肌肥厚組心肌組織EC

4、E-1a，1c亞型表達較假手術(shù)組明顯升高(p＜0.05)，而ECE-1b和1c亞型未見升高。④各實驗組preproET-1表達量未見明顯變化，而心肌肥厚組心肌組織中內(nèi)皮素-1的表達量較假手術(shù)組明顯升高(p＜0.05)。⑤獲得兔抗人ECE-1a，1b，1d和抗ECE-1bcd抗血清，間接ELISA測定抗體滴度≥1：5000，并有良好的特異性。結(jié)論①壓力超負(fù)荷心肌肥厚大鼠ECE-1表達明顯增加，加速內(nèi)皮素-1的產(chǎn)生，促進大鼠心肌肥厚的發(fā)生發(fā)