CXCR4，c-Met與IGF1R在肌損傷組織中肌衛(wèi)星細(xì)胞的表達(dá).pdf

1、[背景與目的]Mauro[1]等1961年首次在蛙骨骼肌中發(fā)現(xiàn)，肌衛(wèi)星細(xì)胞是一種源于胚胎中胚層的干細(xì)胞。肌衛(wèi)星細(xì)胞的增殖和成肌分化受到多種生長(zhǎng)因子的調(diào)節(jié)，有人推測(cè)其中的基質(zhì)衍生因子-1(SDF-1)、肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子(HGF)和胰島素樣生長(zhǎng)因子1(IGF1)等三個(gè)因子在肌肉再生的起始階段可能起著重要作用。細(xì)胞因子需通過相應(yīng)受體的介導(dǎo)才能發(fā)揮其功能，而基質(zhì)細(xì)胞衍生因子受體(CXCR4)、肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體(c-Met)和胰島素樣生長(zhǎng)因子1受

2、體(IGF1R)被認(rèn)為是上述三個(gè)因子的特異性受體。本課題旨在觀察CXCR4，c-Met和IGF1R在正常肌肉組織和注射心臟毒素后所致的肌肉損傷的股四頭肌中肌衛(wèi)星細(xì)胞的表達(dá)情況，為進(jìn)一步研究某些肌肉變性疾病如進(jìn)行性肌營養(yǎng)不良(DMD)在發(fā)病中的分子機(jī)制和治療肌肉退行性變提供參考依據(jù)。[方法]C57雄性小鼠14只，飼養(yǎng)于IVC(獨(dú)立送排風(fēng)籠具)實(shí)驗(yàn)室。隨機(jī)分為7組，1～6組左側(cè)股四頭肌局部注射心臟毒素(5μg/只)，右側(cè)股四頭肌為對(duì)照，第7

3、組用于分離正常肌衛(wèi)星細(xì)胞。1～6組分別在注射后1d，4d、1w、2w、4w、6w頸椎脫臼處死小鼠，完整分離出股四頭肌。浸入4％甲醛溶液中固定，常規(guī)病理包埋切片染色，與對(duì)照C57小鼠股四頭肌進(jìn)行組織學(xué)和免疫組織化學(xué)比較分析。取上述股四頭肌與對(duì)照C57小鼠股四頭肌進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR)比較分析，了解三個(gè)受體的原位表達(dá)情況。從非注射組C57小鼠股四頭肌中分離出肌衛(wèi)星細(xì)胞，觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況，利用免疫細(xì)胞化學(xué)方法和流式細(xì)胞技術(shù)，

4、檢測(cè)三個(gè)受體在肌衛(wèi)星細(xì)胞的體外表達(dá)情況。[結(jié)果]免疫組織化學(xué)和逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)結(jié)果顯示：正常小鼠股四頭肌中CXCR4，c-Met和IGF1R在肌衛(wèi)星細(xì)胞上僅有少量的表達(dá)；與對(duì)照組比較，實(shí)驗(yàn)組注射心臟毒素24h后，三個(gè)受體表達(dá)即明顯增加并持續(xù)到觀察終點(diǎn)的第六周，其中CXCR4、IGFIR表達(dá)量在第二周達(dá)到高峰，c-Met表達(dá)量在第一周達(dá)到高峰，且直到觀察期間末(第6周)，其表達(dá)量仍高于正常肌肉組織。從非注射組股四頭肌分離的肌衛(wèi)星細(xì)胞做

5、免疫細(xì)胞化學(xué)和流式細(xì)胞檢測(cè)顯示：CXCR4、c-Met和IGF1R僅有少量的表達(dá)，其中流式細(xì)胞檢測(cè)結(jié)果CXCR4陽性表達(dá)率為4.6％，c-Met陽性表達(dá)率為3.0％，IGF1R陽性表達(dá)率為3.3％。[結(jié)論]1．本文首次使用心臟毒素骨骼肌注射模型，探討CXCR4、c-Met和IGFIR在骨骼肌再生過程中的作用；結(jié)果提示，CXCR4、c-Met和IGF1R可能是肌肉損傷修復(fù)過程的關(guān)鍵蛋白。2．本實(shí)驗(yàn)通過改進(jìn)骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞培養(yǎng)方法，使肌衛(wèi)星細(xì)