脂多糖對(duì)小鼠骨髓源性平滑肌祖細(xì)胞表達(dá)CXCR4的影響.pdf

1、目的：通過(guò)觀察脂多糖(LPS)對(duì)離體小鼠骨髓源性平滑肌祖細(xì)胞(vascular smooth progenitor muscle cell，SPC)膜表面基質(zhì)細(xì)胞衍生因子受體表達(dá)的影響，探討SDF-1/CXCR4軸在動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)生和發(fā)展過(guò)程中所起的作用，從而探索抗動(dòng)脈粥樣硬化的可能方法。
　　 方法：復(fù)蘇本實(shí)驗(yàn)室已成功分選出的平滑肌祖細(xì)胞，并將其傳代培養(yǎng)，按照實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)分別分為六個(gè)組：①正常對(duì)照組：加入普通培養(yǎng)基；②低劑量組(L

2、組)：加入LPS終濃度為1ug/mL，孵育6h；③中劑量組(M組)：加入LPS終濃度為10ug/mL，孵育6 h；④高劑量組(H組)：加入LPS終濃度為30ug/mL，孵育6 h；⑤12 h組：加入LPS終濃度為10ug/mL，孵育12 h；⑥24 h組：加入LPS終濃度為10ug/mL，孵育24 h。用免疫熒光染色及共聚焦激光掃描顯微鏡分析和蛋白免疫印跡檢測(cè)平滑肌祖細(xì)胞基質(zhì)細(xì)胞衍生因子受體蛋白表達(dá)，逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)檢測(cè)平滑肌祖細(xì)胞基

3、質(zhì)細(xì)胞衍生因子受體mRNA的表達(dá)，觀察脂多糖對(duì)平滑肌祖細(xì)胞表達(dá)基質(zhì)細(xì)胞衍生因子受體的時(shí)效和濃度關(guān)系。
　　 結(jié)果：免疫熒光染色和共聚焦激光掃描顯微鏡分析測(cè)得的結(jié)果與RT-PCR和Western blot檢測(cè)的結(jié)果相一致，未給予脂多糖刺激的平滑肌祖細(xì)胞有基礎(chǔ)水平的基質(zhì)細(xì)胞衍生因子受體表達(dá)，脂多糖是基質(zhì)細(xì)胞衍生因子受體的強(qiáng)誘導(dǎo)物。當(dāng)刺激時(shí)間恒定時(shí)（6h），隨著刺激濃度的增加，L組和M組的基質(zhì)細(xì)胞衍生因子受體表達(dá)逐漸增強(qiáng)，與正常對(duì)照組

4、相比均具有顯著性差異（P＜0.01），H組開始下降。當(dāng)刺激濃度恒定時(shí)（10ug/mL），隨著刺激時(shí)間的延長(zhǎng)，M組和12h組的表達(dá)量也逐級(jí)增強(qiáng)，與正常對(duì)照組相比均具有顯著性差異（P＜0.01）。在所有組中，12h組表達(dá)最強(qiáng)，其mRNA和蛋白水平分別為基礎(chǔ)水平的6.10倍和4.76倍，24h組又下降，但仍高于基礎(chǔ)水平。
　　 結(jié)論：平滑肌祖細(xì)胞能表達(dá)低水平的CXCR4，動(dòng)脈粥樣硬化的危險(xiǎn)因子脂多糖能夠使平滑肌祖細(xì)胞的CXCR4水平上