大鼠骨髓源性內(nèi)皮祖細(xì)胞(EPCs)對(duì)雪旺細(xì)胞(SCs)增殖的影響及黃芪多糖(APS)干預(yù)的研究.pdf

1、目的:
　　觀察大鼠骨髓源性內(nèi)皮祖細(xì)胞(Endothelial Progenitor Cells，EPCs)對(duì)雪旺細(xì)胞(Sehwann Cells，SCs)增殖能力的影響，及黃芪多糖(Astragalus Polysaccharides，APS)對(duì)其干預(yù)的影響。
　　方法:
　　(1)麻醉后處死Wistar大鼠，分離出股骨、脛骨、胸骨、肱骨，除去結(jié)締組織，剪去骨骺端，從骨髓腔的一端將骨髓從另一端沖出。大鼠骨髓利用密度梯

2、度離心技術(shù)分離出單個(gè)核細(xì)胞后進(jìn)行誘導(dǎo)培養(yǎng)，觀察并記錄細(xì)胞形態(tài)變化，培養(yǎng)至第7d，收集貼壁細(xì)胞，備用。激光共聚焦顯微鑒定細(xì)胞，對(duì)DiI-acLDL吞噬及FITC-UEA-1結(jié)合雙陽性為EPCs，流式細(xì)胞儀進(jìn)一步鑒定細(xì)胞。
　　(2)用不同濃度的APS(0.05mg/ml、0.1mg/ml、0.2mg/ml、0.4mg/ml、0.8mg/ml)干預(yù)培養(yǎng)EPCs24小時(shí)，檢測(cè)EPCs數(shù)量和增殖情況。選用濃度為0.4mg/ml的APS干預(yù)

3、培養(yǎng)EPCs不同時(shí)間(0h、6h、12h、24h、48h)，檢測(cè)EPCs數(shù)量和增殖情況。
　　(3)將購買的雪旺細(xì)胞株適應(yīng)性培養(yǎng)并傳代至生長(zhǎng)對(duì)數(shù)期，收集SCs。用上述不同濃度的APS干預(yù)培養(yǎng)SCs24小時(shí)，MTT法檢測(cè)SCs增殖情況。選用濃度為0.4mg/ml的APS干預(yù)培養(yǎng)SCs上述不同時(shí)間，檢測(cè)SCs增殖情況。
　　(4)將EPCs接種在Transwell小室內(nèi)與SCs建立共培養(yǎng)體系，設(shè)立SCs空白對(duì)照組，EPCs與SC

4、s共培養(yǎng)0h、6h、12h、24h、48h不同時(shí)間，MTT法檢測(cè)SCs的增殖情況。
　　(5)加入各濃度的APS干預(yù)共培養(yǎng)體系，用MTT法檢測(cè)SCs增殖情況;采用濃度為0.4mg/ml的APS干預(yù)共培養(yǎng)體系不同的時(shí)間，用MTT法檢測(cè)SCs增殖情況。
　　結(jié)果:
　　(1)大鼠骨髓利用密度梯度離心法分離單個(gè)核細(xì)胞培養(yǎng)7天，激光共聚焦顯微觀察DiI-acLDL吞噬及FITC-UEA-1結(jié)合雙陽性;流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞VEGF

5、R-2/CD34、VEGFR-2/CD133表達(dá)的陽性率，證實(shí)為EPCs。
　　(2)APS對(duì)大鼠骨髓源性EPCs的數(shù)量和增殖能力的影響:APS能明顯增加大鼠骨髓源性EPCs的數(shù)量和增殖能力，呈一定的量效與時(shí)效關(guān)系，在濃度為0.1mg/ml時(shí)較對(duì)照組增強(qiáng)(P＜0.05)，0.4mg/ml時(shí)達(dá)高峰(P＜0.01)。0.4mg/ml的APS干預(yù)12h其影響較對(duì)照組明顯增強(qiáng)(P＜0.01)，24h達(dá)到最佳效應(yīng)，48h時(shí)略有下降，但仍明顯

6、高于對(duì)照組(P＜0.01)。
　　(3)APS對(duì)SCs增殖能力的影響:APS能明顯增加SCs增殖能力，呈一定的量效與時(shí)效關(guān)系，在濃度為0.05mg/ml時(shí)較對(duì)照組增強(qiáng)(P＜0.05)，0.4mg/ml時(shí)達(dá)高峰(P＜0.01)。0.4mg/ml的APS干預(yù)6h，其增殖能力開始增強(qiáng)(P＜0.05)，24h達(dá)到最佳效應(yīng)，48h略有下降，但仍明顯高于對(duì)照組（P＜0.01）。
　　(4)EPCs對(duì)SCs增殖的影響:EPCs能明顯增強(qiáng)S

7、Cs增殖能力，在共培養(yǎng)6h SCs增殖能力開始增強(qiáng)(P＜0.05)，12h～24h時(shí)間段SCs增殖能力呈時(shí)間依賴性增強(qiáng)(P＜0.01)，24h達(dá)到最佳效應(yīng)，48h略有下降，但仍明顯高于對(duì)照組(P＜0.01)。
　　(5)APS干預(yù)共培養(yǎng)體系，對(duì)SCs增殖能力的影響:APS明顯增強(qiáng)共培養(yǎng)體系中SCs的增殖能力，呈一定的量效與時(shí)效關(guān)系，其增殖能力在濃度為0.05mg/ml時(shí)開始增強(qiáng)(P＜0.05)，0.4mg/ml時(shí)達(dá)高峰。0.4mg

8、/ml的APS干預(yù)共培養(yǎng)體系，6小時(shí)SCs增殖能力開始增強(qiáng)（P＜0.05），24h達(dá)到最佳效應(yīng)，48h略有下降，但仍明顯高于對(duì)照組(P＜0.01)。
　　結(jié)論:
　　(1)大鼠骨髓利用密度梯度離心技術(shù)分離出單個(gè)核細(xì)胞后進(jìn)行誘導(dǎo)培養(yǎng)，細(xì)胞經(jīng)鑒定證實(shí)為EPCs，為后期試驗(yàn)順利進(jìn)行奠定了基礎(chǔ)。
　　(2)APS能明顯增加EPCs的數(shù)量和增殖能力，呈一定的濃度和時(shí)間依賴性。
　　(3)APS能明顯增強(qiáng)SCs的增殖能力，呈