miR-26b影響脂肪細(xì)胞胰島素敏感性的機(jī)制分析.pdf

1、目的：闡明miR-26b過(guò)表達(dá)對(duì)脂肪細(xì)胞胰島素敏感性調(diào)控的分子機(jī)制。
　　方法：
　　1.高脂飲食喂養(yǎng)SD大鼠，建立飲食誘導(dǎo)肥胖（Diet-induced obesity,DIO）大鼠模型。高糖、高胰島素環(huán)境下誘導(dǎo)建立3T3-L1/HPA-v胰島素抵抗脂肪細(xì)胞模型；
　　2.采用Real time PCR技術(shù)，檢測(cè)動(dòng)物及細(xì)胞模型中miR-26b的表達(dá)；
　　3.胰島素（Insulin）、3-異丁基-1-甲基黃嘌呤

2、（3-isobutyl-1-methyxanthine,MIX）、地塞米松（Dexamethasone,Dex）混合誘導(dǎo)劑誘導(dǎo)3T3-L1前體脂肪細(xì)胞分化為成熟脂肪細(xì)胞。胰島素、3-異丁基-1-甲基黃嘌呤、地塞米松和羅格列酮（rosiglitazone）混合誘導(dǎo)劑誘導(dǎo)HPA-v前體脂肪細(xì)胞分化為成熟脂肪細(xì)胞；
　　4.構(gòu)建miR-26b過(guò)表達(dá)慢病毒表達(dá)載體，感染人成熟脂肪細(xì)胞；48h后在熒光顯微鏡下，判斷病毒感染的效率；
　

3、　5.采用同位素標(biāo)記葡萄糖進(jìn)行糖攝取實(shí)驗(yàn)，檢測(cè)胰島素刺激下脂肪細(xì)胞對(duì)葡萄糖攝取量的變化；
　　6. Western Blot技術(shù)，檢測(cè) PI3K信號(hào)通路中關(guān)鍵蛋白分子胰島素受體（insulin recepor,IR）、胰島素受體底物（insulin receptor substrate,IRS）、AKT、p-AKT、葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)體-4（Glucose transporter type4,GLUT4）的表達(dá)及GLUT4膜蛋白（mGLU

4、T4）的含量；
　　7.生物信息學(xué)預(yù)測(cè)miR-26b的靶標(biāo)，采用熒光素酶報(bào)告實(shí)驗(yàn)進(jìn)行靶標(biāo)驗(yàn)證。
　　結(jié)果：
　　1.高脂飲食誘導(dǎo)后SD大鼠出現(xiàn)肥胖及代謝紊亂的特征，成功構(gòu)建DIO大鼠模型。DIO大鼠腸系膜脂肪組織中miR-26b的表達(dá)水平下降，且與應(yīng)用穩(wěn)態(tài)模型評(píng)估的胰島素抵抗指數(shù)（Homeostasis model assessment of insulin resistance, HOMA-IR）呈顯著負(fù)相關(guān)；

5、>　　2.胰島素抵抗細(xì)胞模型中miR-26b的表達(dá)水平顯著降低；
　　3.miR-26b過(guò)表達(dá)促進(jìn)脂肪細(xì)胞胰島素刺激下的葡萄糖攝??；
　　4.miR-26b過(guò)表達(dá)可以顯著上調(diào)脂肪細(xì)胞胰島素刺激下的mGLUT4含量；
　　5.miR-26b過(guò)表達(dá)可以顯著提高磷脂酰肌醇激酶3（phosphatidylinositol3-kinase, PI3K）胰島素信號(hào)通路中p-AKT水平；
　　6.熒光素酶實(shí)驗(yàn)的結(jié)果表明，第10