造血干細胞計數(shù)全血質(zhì)控物的研制與評價.pdf

1、目的：
　　 為提高臨床實驗室造血干細胞計數(shù)結(jié)果的準確性和可比性，實驗室需要開展室內(nèi)質(zhì)量控制，并參加室間質(zhì)量評價活動。這些質(zhì)量保證措施的實施均需要使用合格的造血干細胞計數(shù)全血質(zhì)控物，但是目前國內(nèi)尚無機構(gòu)生產(chǎn)此類質(zhì)控物，只能依靠國外生產(chǎn)商（如美國BeckmanCoulter公司、美國BD公司等）生產(chǎn)的質(zhì)控物。由于進口全血質(zhì)控物價格昂貴，有效期短，入關(guān)手續(xù)繁瑣，適用性欠佳等原因，限制了室內(nèi)質(zhì)量控制和室間質(zhì)量評價活動的開展。為推動質(zhì)量

2、保證措施的實施，衛(wèi)生部臨床檢驗中心參考了大量國內(nèi)外文獻及專利，以新鮮人臍帶血為原材料，研制了造血干細胞計數(shù)全血質(zhì)控物，并對質(zhì)控物的均勻性、穩(wěn)定性及適用性等性能進行了評價。
　　 方法
　　 1．質(zhì)控物的研制：通過實驗對造血干細胞計數(shù)全血質(zhì)控物制備過程中的影響因素進行研究，從而篩選質(zhì)控物原材料，并優(yōu)化制備方案。
　　 (1)通過實驗對原材料自身穩(wěn)定性進行觀察，確定原材料篩選范圍及處理時限，并調(diào)查獲得可用于制備質(zhì)控物

3、的原材料的可行性。
　　 (2)選用14種的分離條件分離新鮮臍帶血中的不同成分，并通過對分離條件的優(yōu)化，提高分離方法的回收效率。
　　 (3)選用4種固定液對新鮮臍帶血進行固定，并通過對固定液濃度的優(yōu)化，改善固定效果。
　　 (4)根據(jù)上述實驗結(jié)果，確定了最佳制備方案，進而制備了20111101和20111110兩個批號的造血干細胞計數(shù)全血質(zhì)控物，每批質(zhì)控物各200支。
　　 2．質(zhì)控物的評價
　　

4、 (1)對紅細胞裂解性能和白細胞散射特性進行了評價。
　　 2)依據(jù)CNAS-GL03《能力驗證樣品均勻性和穩(wěn)定性評價指南》及ISOGuide35《標準物質(zhì)/標準樣品的定值—通用原則和統(tǒng)計原理》的要求，對自制質(zhì)控物CD34+細胞百分比指標的均勻性、穩(wěn)定性進行評價，同時檢測進口質(zhì)控物作為對照。
　　 (3)選擇2種主流機型流式細胞儀各4家實驗室對自制質(zhì)控物的適用性進行評價。
　　 (4)將自制質(zhì)控物試用于Cou

5、lter-EPICSXL機型流式細胞儀室內(nèi)質(zhì)量控制。
　　 結(jié)果
　　 1．選用由北京市臍血庫提供的新鮮臍帶血做為質(zhì)控物制備原材料。
　　 2．選用2號濃度的B固定液制備質(zhì)控物。
　　 3．自制質(zhì)控物的紅細胞裂解性能評價結(jié)果顯示，兩個批號的質(zhì)控物分別用兩種常用溶血劑溶血后，流式上樣管底無肉眼可見的紅色沉積物；流式細胞儀白細胞散射圖顯示有核細胞分群清晰良好，無紅細胞及細胞碎片干擾，白細胞散射特性保持完好。<

6、br>　　 4．自制質(zhì)控物均勻性評價結(jié)果顯示，質(zhì)控物樣品內(nèi)和樣品間差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)；20111101、20111110批號質(zhì)控物CD34+細胞百分比指標均勻性評價結(jié)果的變異系數(shù)(CV)分別為5.40％和6.12%；不確定度分別為0.004%和0.003%;20111208、20111222新鮮標本重復(fù)性測量的不確定度為0.010%和0.008%。
　　 5．自制質(zhì)控物穩(wěn)定性評價結(jié)果顯示，20111101、201

7、11110批號質(zhì)控物及進口質(zhì)控物CD34+細胞百分比指標，8周內(nèi)檢測結(jié)果無線性趨勢變化(P值均大于0.05);20111101,20111110批號質(zhì)控物和進口質(zhì)控物8周內(nèi)CD34+細胞百分比指標的百分偏差范圍分別為-1.04%～5.05%、-1.35%～2.47%和-2.26%～1.50%;不確定度分別為0.023%、0.015%和0.012%。
　　 6．自制質(zhì)控物在兩種型號流式細胞儀上進行檢測，白細胞分群清晰，CD34+細

8、胞群與陰性細胞群分離明顯。FS-1批號質(zhì)控物CD34+細胞百分比指標在BD-FACSCalibur、Coulter-EPICSXL機型儀器間檢測結(jié)果的變異范圍分別為5.73%和4.53。FS-2批號質(zhì)控物在BD-FACSCalibur、Coulter-EPICSXL機型儀器間檢測結(jié)果的變異范圍分別為6.72%和3.50%。
　　 7．室內(nèi)質(zhì)量控制試應(yīng)用結(jié)果顯示，20111101、20111110批號質(zhì)控物和進口質(zhì)控物在56天內(nèi)的

9、10次檢測結(jié)果的CV分別為2.02%，1.24%和0.94%。
　　 結(jié)論：
　　 新鮮臍帶血12小時內(nèi)可保持穩(wěn)定，且易采集，血量較大，故選用由北京市臍血庫提供的可用于科學研究的新鮮臍帶血作為質(zhì)控物制備原材料。因新鮮臍帶血制備的全血質(zhì)控物與臨床接收標本成分相似，所以能更好地模擬臨床標本，評價實驗室日常計數(shù)造血干細胞的能力。
　　 自制質(zhì)控物的紅細胞裂解性能良好，白細胞散射特性可保持完好，有核細胞分群清晰；均勻性評

10、價結(jié)果良好，可認為自制質(zhì)控物是均一的；穩(wěn)定性評價結(jié)果顯示自制質(zhì)控物8周內(nèi)可保持穩(wěn)定，性能與進口質(zhì)控物穩(wěn)定性相似；使用BD-FACSCalibur、Coulter-EPICSXL機型各4臺流式細胞儀檢測自制質(zhì)控物，檢測結(jié)果組內(nèi)CV小于10%，組間CV小于10%，圖形結(jié)果白細胞分群清晰無交叉，CD34陽性細胞與陰性細胞群分離明顯，適用性評價良好，可認為自制質(zhì)控物適用于BD-FACSCalibur、Coulter-FPICSXL機型流式細胞儀