網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)質(zhì)控物的研制與評(píng)價(jià).pdf

1、目的：為了保證網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)檢測(cè)結(jié)果的可靠性和可比性，臨床實(shí)驗(yàn)室要開(kāi)展室內(nèi)質(zhì)量控制，并參加室間質(zhì)量評(píng)價(jià)活動(dòng)。這些質(zhì)量保證措施的開(kāi)展均需要合格的網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)質(zhì)控物，但是目前無(wú)國(guó)產(chǎn)的網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)質(zhì)控物，質(zhì)控物的提供主要依賴于國(guó)外生產(chǎn)商(比如Sysme公司的e—CHECK等)，進(jìn)口網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)質(zhì)控物價(jià)格昂貴，購(gòu)買周期長(zhǎng)，給臨床實(shí)驗(yàn)室和室間質(zhì)量評(píng)價(jià)組織機(jī)構(gòu)的應(yīng)用帶來(lái)很大困難。為此，衛(wèi)生部臨床檢驗(yàn)中心參考國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)，以豬血為原料研制了網(wǎng)織紅

2、細(xì)胞計(jì)數(shù)質(zhì)控物。 方法：研制過(guò)程中，對(duì)多種影響因素進(jìn)行了分析和研究，選擇最佳制備方案，制備出以豬血為原料的批號(hào)分別為2008112501、2008112502、2009032601、2009032602、2009032603、2009032604、2009032605的網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)質(zhì)控物。依據(jù)CNAS—GL03《能力驗(yàn)證樣品均勻性和穩(wěn)定性評(píng)價(jià)指南》及ISO Guide35《標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)/標(biāo)準(zhǔn)樣品的定值—通用原則和統(tǒng)計(jì)原理》，對(duì)自制

3、質(zhì)控物進(jìn)行均勻性和穩(wěn)定性評(píng)價(jià)。從各批號(hào)自制質(zhì)控物中隨機(jī)抽取出足夠數(shù)量的樣本，每支樣本重復(fù)檢測(cè)兩次，對(duì)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行單因素方差分析并計(jì)算均勻性的不確定度，同時(shí)檢測(cè)進(jìn)口質(zhì)控物進(jìn)行比較，因?yàn)檫M(jìn)口質(zhì)控物購(gòu)買不便，選取兩支進(jìn)口質(zhì)控物分別連續(xù)檢測(cè)9次，將所得結(jié)果與自制質(zhì)控物均勻性檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行比較；將按照隨機(jī)順序抽取的質(zhì)控物分別放置于冷藏條件(2～8℃)、室溫條件(18～25℃)、37℃條件，按照不同的時(shí)間間隔對(duì)質(zhì)控物進(jìn)行檢測(cè)，觀察不同放置溫度對(duì)質(zhì)控物

4、檢測(cè)結(jié)果的影響；將質(zhì)控物開(kāi)瓶檢測(cè)后重新放置于冷藏條件(2～8℃)，按照不同的時(shí)間間隔對(duì)質(zhì)控物進(jìn)行檢測(cè)，觀察質(zhì)控物的開(kāi)蓋穩(wěn)定性；將質(zhì)控物放置于冷藏條件(2～8℃)，按照不同時(shí)間間隔隨機(jī)抽取質(zhì)控物進(jìn)行檢測(cè)，用一元線性回歸分析評(píng)價(jià)質(zhì)控物的長(zhǎng)期穩(wěn)定性，并對(duì)穩(wěn)定性的不確定度進(jìn)行計(jì)算，同時(shí)將自制質(zhì)控物穩(wěn)定性檢測(cè)數(shù)據(jù)與進(jìn)口質(zhì)控物室內(nèi)質(zhì)控?cái)?shù)據(jù)進(jìn)行比較；選用Sysmex XE2100，Sysmex SE9500，Coulter LH750，Coulter

5、 HmX，Bayer AVDIA120型號(hào)的血液分析儀對(duì)自制網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)質(zhì)控物檢測(cè)以觀察質(zhì)控物是否適用于不同型號(hào)儀器；使用手工法對(duì)自制質(zhì)控物進(jìn)行煌焦油藍(lán)染色后鏡檢計(jì)數(shù)，觀察質(zhì)控物是否適用于手工法檢測(cè)；將自制質(zhì)控物試用于室內(nèi)質(zhì)量控制，與進(jìn)口質(zhì)控物同時(shí)在Sysmex XE2100上進(jìn)行檢測(cè)，將所得結(jié)果進(jìn)行比較。 結(jié)果：①篩選方案，制備了以豬血為原料的網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)質(zhì)控物；②自制2008112501、2008112502、20090

6、32601、2009032602、2009032603、2009032604、2009032605批號(hào)質(zhì)控物網(wǎng)織紅細(xì)胞百分比檢測(cè)結(jié)果的變異系數(shù)(CV)分別為4.2％、5.9、8.1％、5.2％、6.3％、3.3％、7％，進(jìn)口82590801、82590803批號(hào)網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)百分比檢測(cè)結(jié)果的變異系數(shù)為2.9％、5.9％；對(duì)自制質(zhì)控物均勻性檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行方差分析，樣品內(nèi)和樣品間統(tǒng)計(jì)學(xué)分析差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；各批號(hào)質(zhì)控物均勻性檢

7、測(cè)結(jié)果的不確定度分別為0.330％、0.039％、0.096％、0.113％、0.434％、0.268％、1.821％，各批號(hào)的均勻性檢測(cè)結(jié)果不確定度均小于或接近于各自批號(hào)的重復(fù)性測(cè)量的不確定度；⑨2009032601及2009032604批號(hào)的質(zhì)控物室溫(18～25℃)放置相對(duì)于冷藏(2～8℃)放置15天檢測(cè)結(jié)果的最大偏差分別為5.81％、2.72％，可以認(rèn)為室溫下放置15天對(duì)質(zhì)控物檢測(cè)結(jié)果無(wú)影響；質(zhì)控物在37℃放置后，下層細(xì)胞凝結(jié)成

8、塊，不易混勻，表明質(zhì)控物不宜高溫放置；④2008112501、2008112502批號(hào)質(zhì)控物14天開(kāi)瓶穩(wěn)定性檢測(cè)結(jié)果的偏差分布范圍為—5.0％～0、—12.3％～0，對(duì)其進(jìn)行方差分析，P值均大于0.05，統(tǒng)計(jì)學(xué)上無(wú)顯著意義：⑤自制2008112501、2008112502批號(hào)質(zhì)控物70天內(nèi)的穩(wěn)定性檢測(cè)結(jié)果CV值分別為1.8％、2.3％，隨儲(chǔ)存時(shí)間不存在明顯趨勢(shì)變化(P>0.05)；82590801、82590803進(jìn)口批號(hào)質(zhì)控物49天內(nèi)

9、的穩(wěn)定性檢測(cè)結(jié)果CV值分別為5.9％、6.4％，隨儲(chǔ)存時(shí)間不存在明顯趨勢(shì)變化(P>0.05)；當(dāng)效期為70天時(shí)，2008112501、2008112502批號(hào)質(zhì)控物長(zhǎng)期穩(wěn)定性檢測(cè)結(jié)果的不確定度為0.066％、0.0297％，均小于各自批號(hào)重復(fù)性測(cè)量的不確定度。⑥不同批號(hào)自制質(zhì)控物在Sysmex XE2100、SysmexSE9500、Coulter LH750、Bayer AVDIA120上檢測(cè)結(jié)果的Cv值范圍分別為3.3％～8.1％、

10、5.3％～11.6％、9.2％～9.7％、3.9～8.9％，在Coulter HmX型號(hào)儀器上檢測(cè)結(jié)果重復(fù)性很差，CV值為93.7％。⑦不同批號(hào)自制質(zhì)控物使用手工法對(duì)網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)百分比進(jìn)行檢測(cè)，CV值分別為25％、21.8％、16.9％、13.1％、10.4％。⑨2009032601、2009032604批號(hào)自制質(zhì)控物室內(nèi)質(zhì)量控制檢測(cè)結(jié)果的cv值分別為2.7％、3.3％，90610801、90610802、90610803批號(hào)的進(jìn)口質(zhì)

11、控物室內(nèi)質(zhì)量控制檢測(cè)結(jié)果的CV值分別為7.1％、4.7％、6.4％，自制質(zhì)控物與進(jìn)口質(zhì)控物每日檢測(cè)結(jié)果都在均值±3SD范圍之內(nèi)?？梢哉J(rèn)為自制的網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)質(zhì)控物適用于Sysmex XE2100作室內(nèi)質(zhì)控。 結(jié)論：研制的網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)質(zhì)控物均勻性良好；在室溫下放置15天可保持穩(wěn)定，而37℃放置不穩(wěn)定；14天內(nèi)的開(kāi)瓶穩(wěn)定性良好；在冷藏條件下放置70天可保持穩(wěn)定；可用于Sysmex XE2100，Sysmex SE9500，Coul

12、ter LH750，BayerAVDIA120型號(hào)血液分析儀進(jìn)行網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)的檢測(cè)，不適用于Coulter HmX型號(hào)血液分析儀，考慮可能與Coulter HmX進(jìn)行網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)檢測(cè)為半自動(dòng)檢測(cè)，需要預(yù)先對(duì)質(zhì)控物進(jìn)行手工染色有關(guān)，因?yàn)槿珖?guó)范圍內(nèi)采用Coulter HmX型號(hào)血液分析儀進(jìn)行網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)檢測(cè)的醫(yī)院只有5家，考慮對(duì)將來(lái)室間質(zhì)評(píng)活動(dòng)的開(kāi)展影響不大；手工法計(jì)數(shù)結(jié)果的CV值較大，考慮與手工法方法本身重復(fù)性不佳，計(jì)數(shù)細(xì)胞數(shù)目較少