夏枯草多糖的分離分析.pdf

1、夏枯草為唇形科夏枯草屬植物夏枯草的干燥果穗，因“此草夏至后即枯”得名。目前的研究表明夏枯草多糖有降壓及降血脂作用，抗菌、抗病毒作用，降糖作用，抗炎及免疫抑制作用，抗腫瘤作用。由于夏枯草有重要的臨床應(yīng)用價(jià)值和開(kāi)發(fā)利用價(jià)值，是一種有潛力的藥物資源，而越來(lái)越引起人們的關(guān)注。 本實(shí)驗(yàn)以夏枯草為原料，針對(duì)目前夏枯草多糖的研究現(xiàn)狀，從以下幾方面展開(kāi)研究工作： 1)采用90℃熱水提取，并對(duì)提取條件進(jìn)行了優(yōu)化，得到夏枯草粗多糖，并經(jīng)分級(jí)

2、醇沉得到幾個(gè)級(jí)分；然后測(cè)定了醇沉后的活性成分AEPS1中的硫酸基含量和蛋白質(zhì)含量；經(jīng)陰離子交換柱層析、凝膠柱層析對(duì)粗多糖AEPS1進(jìn)行分級(jí)純化；通過(guò)高效凝膠過(guò)濾色譜測(cè)得了AEPS1的主要組分PLS3的重均分子量為8.3×10<'5>Da，并對(duì)PLS3進(jìn)行了紅外分析和其比旋光度測(cè)定，得到了其初步結(jié)構(gòu)。 2)對(duì)傳統(tǒng)苯酚硫酸法進(jìn)行改進(jìn)，在用苯酚-硫酸法測(cè)定多糖含量的過(guò)程中，考察了硫酸的加入方式和加入硫酸后的放置溫度對(duì)吸光度和靈敏度的影

3、響：隨著溫度的升高，兩條線(xiàn)趨于靠攏，在110℃時(shí)幾乎重合，確定最佳加入方式為垂直加入，加入硫酸搖晃后最佳油浴溫度為110℃。并按各多糖的單糖組成配置相應(yīng)的混合標(biāo)樣，根據(jù)相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)測(cè)得夏枯草多糖和其純品PLS3的總糖含量，減小了誤差、提高了靈敏度。因此,改良后的苯酚硫酸法為糖含量的測(cè)定提供了更為有效的方法。并用改良的苯酚硫酸法測(cè)定了夏枯草粗多糖和PLs3的多糖含量分別為81.62％和85.33％。三次測(cè)定結(jié)果的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.56％

4、和0.34％。 3)建立了一種柱前對(duì)氨基苯甲酸(p-AMBA)衍生反相離子對(duì)色譜法同時(shí)分離檢測(cè)多糖中多種單糖及糖醛酸組成的方法，篩選出適合于p-AMBA糖衍生物分離的色譜柱，考察了柱溫、流動(dòng)相組成等對(duì)10種單糖和兩種糖醛酸的p-AMBA衍生化產(chǎn)物的保留值及分離的影響，優(yōu)化了反應(yīng)溫度和反應(yīng)時(shí)間等衍生化條件。采用紫外檢測(cè)器時(shí)，方法的檢出限為(2.55～13.4)×10<'-7>mol/L;采用熒光檢測(cè)器時(shí)，方法的檢出限為(3.38～

5、176)×10<'-8>mol/L；并用建立的p-AMBA柱前衍生化高效液相色譜法測(cè)定了夏枯草粗多糖AEPS1和PLS3以及螺旋藻多糖的單糖組成，發(fā)現(xiàn)夏枯草粗多糖和其主成分PLS3兩者所含單糖種類(lèi)一致，都為半乳糖、葡萄糖、甘露糖、木糖、阿拉伯糖、鼠李糖，但兩種物質(zhì)的單糖組成相對(duì)摩爾百分比有所差異。螺旋藻多糖含有Fruc、 Gal、 Glc、Man、Xyl、Ara、Rib、GalUA、Fuc、GlcUA及Rha，其摩爾比為：27.6：21

6、.9：371.3：2.2；12.2：5.6: 3.4; 4.6：4.2：1：4.8，比以往文獻(xiàn)中同時(shí)檢出的單糖和糖醛酸種類(lèi)要多。以經(jīng)典的氣相色譜法驗(yàn)證結(jié)果顯示：新建立的對(duì)氨基苯甲酸衍生化法不僅結(jié)果可靠，而且有更高的靈敏度，能同時(shí)分離出的單糖種類(lèi)較其他方法要多。 通過(guò)上述研究，建立了一種更好的測(cè)定夏枯草多糖的單糖組成的方法，并對(duì)夏枯草多糖的測(cè)定、波譜學(xué)行為進(jìn)行必要的探討，為制定夏枯草藥品和保健品的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)奠定相應(yīng)的基礎(chǔ)，為分析檢測(cè)