microRNA-183下調EGR1對人滑膜肉瘤細胞株SW982耐藥、侵襲、遷移能力的影響.pdf

1、目的:探討微小RNA-183(miR-183)對人滑膜肉瘤細胞株SW982耐藥、侵襲、侵襲能力的影響，并分析早期生長反應因子1(EGR1)作為其潛在靶點的可能。
　　方法:采用脂質體轉染技術轉染miR-183 mimics/inhibitors/N.C，上調/下調SW982細胞中miR-183的表達;流式細胞術及Real-time PCR檢測轉染效率;噻唑藍(MTT)法檢測轉染后SW982細胞增值率; MTT法測定轉染24h、48

2、h、72h后10 tmmol/l多柔比星對SW982滑膜肉瘤細胞抑制情況;流式細胞術檢測轉染效率及轉染前后細胞周期的改變，AnnexinⅤ-FITC/PI雙染法檢測轉染前后細胞凋亡的影響;Transwell實驗比較轉染前后SW982細胞遷移、侵襲能力的變化。Western blot檢測轉染前后各組中EGR1含量的變化;雙熒光素酶報告基因實驗驗證EGR1是否為miR-183靶基因。
　　結果:轉染miR-183 mimics/inh

3、ibitors/N.C后，SW982細胞中miR-183的含量明顯發(fā)生改變;與正常組相比mimics組miR-183含量明顯增加(P＜0.001)，inhibitors組miR-183含量明顯降低(P＜0.001)，N.C組miR-183含量明顯無明顯變化(P=0.637)。在細胞增殖、周期、凋亡實驗中，結果顯示轉染前后SW982細胞株中的細胞增殖、周期、凋亡無明顯變化。在耐藥實驗中，轉染后，多柔比星作用24h后mimics組（0.00

4、51±0.022）抑制率較正常組（0.0903±0.039）明顯減低（P=0.003）;inhibitors組（0.1351±0.062）抑制率較正常組（0.0281±0.033）明顯增高(P=0.009)。Transwell實驗結果顯示，在遷移實驗中，mimics組和inhibitor組穿膜細胞數(shù)分別為108.61±4.94個、54.36±4.03個(P＜0.001);在侵襲實驗中，mimics組和inhibitor組穿膜細胞數(shù)分別為

5、79.13±5.77個，20.87±3.17個(P=0.036)。EGR1表達分析中，轉染48h后mimics組中EGR1表達較正常組明顯減低(P＜0.001);inhibitors組中EGR1表達較正常組明顯增高(P=0.012);雙熒光素酶報告基因實驗表明，miR-183可特異性靶向EGR1基因。
　　結論:miR-183參與調控SW982細胞耐藥、侵襲及遷移;EGR1可能是其潛在靶點。miR-183對SW982細胞的增值、周