柴苓湯對(duì)梗阻性腎病大鼠MCP-1及α-SMA表達(dá)的影響.pdf

1、目的：慢性腎功能衰竭是一種嚴(yán)重危害人類身體健康的慢性進(jìn)展性疾病，在該病的防治中，中醫(yī)藥有著獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)，早中期采用中醫(yī)中藥是目前公認(rèn)的重要方法。導(dǎo)師丁躍玲教授通過對(duì)腎臟疾病理論的多年研究和臨床實(shí)踐，認(rèn)為腎小管間質(zhì)纖維化除屬于祖國(guó)醫(yī)學(xué)脾。腎陽虛、正虛絡(luò)阻、毒損腎絡(luò)的范疇外，少陽失和、三焦不利是本病早期的又一重要病理機(jī)制。以張仲景的小柴胡湯和五苓散組成柴苓湯，具有疏解少陽、利水滲濕的功能，臨床表明疏利少陽之法是延緩慢性腎功能衰竭進(jìn)程的重要方法

2、之一。為進(jìn)一步探討柴苓湯延緩慢性腎功能衰竭的作用機(jī)制進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)研究，該實(shí)驗(yàn)采用結(jié)扎大鼠單側(cè)輸尿管的腎小管間質(zhì)纖維化模型，通過生化、光鏡、免疫組化的方法以及病理圖像分析，觀察了該方對(duì)24h尿蛋白定量、血肌酐、尿素氮等項(xiàng)腎功能指標(biāo)及腎組織病理形態(tài)學(xué)改變、MCP-1和α-SMA表達(dá)的影響，為疏利少陽之法論治慢性腎衰的作用機(jī)制提供進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 第一部分柴苓湯對(duì)梗阻性腎病大鼠腎功能及腎組織病理形態(tài)學(xué)的影響 方法：純系健康SD

3、雌性大鼠40只，隨機(jī)分為假手術(shù)組(Sham group)、病理模型組(UUO group)、柴苓湯組(UUOCgroup)、纈沙坦組(UUOV group)。造模方法：采用結(jié)扎大鼠單側(cè)輸尿管(UUO)復(fù)制腎小管一間質(zhì)損傷模型。病理模型組、柴苓湯組、纈沙坦組均結(jié)扎左側(cè)輸尿管。從造模前一天起開始預(yù)防性治療，病理模型組和假手術(shù)組給予等量蒸餾水灌胃。實(shí)驗(yàn)周期共2周。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，取左、右腎稱重，留取光鏡標(biāo)本。測(cè)定24h尿蛋白定量、血肌酐、尿素氮。

4、腎組織光鏡標(biāo)本HE和Masson染色后，光鏡下觀察腎臟皮質(zhì)區(qū)及皮髓交界區(qū)腎小管和間質(zhì)的結(jié)構(gòu)變化。 結(jié)果: 1.左腎重/右腎重、24h尿蛋白定量檢測(cè)結(jié)果病理模型組大鼠體重增長(zhǎng)緩慢，甚至下降，實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，左側(cè)腎臟體積增大。左腎重/右腎重：假手術(shù)組(1.00±0.04)，病理模型組(3.25±0.73)，柴苓湯組(2.16±0.31)，纈沙坦組(2.16±0.25)；病理模型組顯著高于假手術(shù)組；柴苓湯組、纈沙坦組與病理模型組

5、比較有所降低。24h尿蛋白各組比較無顯著性差異。 2.血肌酐、尿素氮測(cè)定結(jié)果血肌酐實(shí)驗(yàn)各組與假手術(shù)組比較無明顯差異。尿素氮：假手術(shù)組(3.30±0.38)，病理模型組(6.28±1.14)，柴苓湯組(4.26±0.52)，纈沙坦組(4.24±0.55)；病理模型組明顯高于假手術(shù)組，柴苓湯組、纈沙坦組與病理模型組比較明顯降低。 3.腎組織病理形態(tài)學(xué)觀察光鏡下假手術(shù)組腎小球和腎小管及間質(zhì)結(jié)構(gòu)正常；病理模型組HE染色可見腎皮質(zhì)

6、區(qū)及皮髓交界處腎小管上皮細(xì)胞壞死脫落，腎小管管腔擴(kuò)張，部分腎小管呈灶狀萎縮，間質(zhì)增寬，間質(zhì)內(nèi)可見炎性細(xì)胞浸潤(rùn)；Masson染色可見增寬的間質(zhì)區(qū)大量膠原纖維增生，間質(zhì)纖維化呈灶狀分布；柴苓湯組和纈沙坦組光鏡下腎小管和腎間質(zhì)病理改變較病理模型組明顯改善，腎小管較少萎縮、管腔輕度擴(kuò)張，上皮細(xì)胞壞死、脫落較少，腎間質(zhì)增寬較輕、少量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，腎小管間質(zhì)纖維化程度較輕。 第二部分柴苓湯對(duì)腎小管間質(zhì)纖維化大鼠MCP-1、α-SMA表達(dá)的影

7、響 方法：實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及分組、模型制作和給藥方法同前。腎組織的α-SMA、MCP-1蛋白表達(dá)采用免疫組化PV-6001/PV-6002二步免疫組化檢測(cè)法。鏡下觀察α-SMA、MCP-1免疫組化表達(dá)結(jié)果并進(jìn)行病理圖像半定量分析。 結(jié)果: 1.腎組織α-SMA的免疫組化檢測(cè)結(jié)果光鏡下觀察：假手術(shù)組腎小上皮細(xì)胞無表達(dá)，僅血管平滑肌細(xì)胞有強(qiáng)陽性表達(dá)；模型組主要在皮質(zhì)區(qū)及皮髓交界的腎小管及間質(zhì)區(qū)細(xì)胞漿內(nèi)，以部分腎小管上皮細(xì)胞及

8、其周圍間質(zhì)區(qū)表達(dá)明顯，且與局部間質(zhì)增寬及腎小管病變程度一致；柴苓湯組、纈沙坦組較病理模型組明顯減少。病理圖象半定量分析平均積分光密度、面密度：假手術(shù)組(400.32±206.55；2.45±0.5)，病理模型組(10847.93±1446.45；66.88±20.67)，柴苓湯組(3770.16±471.70；25.45±6.36)，纈沙坦組(3386.80±300.31；23.27±6.02)；病理模型組明顯高于假手術(shù)組；柴苓湯組和纈

9、沙坦組較病理模型組兩項(xiàng)指標(biāo)明顯減少；柴苓湯組與纈沙湯坦組比較無顯著性差異。 2.腎組織MCP-1的免疫組化檢測(cè)結(jié)果光鏡下觀察：假手術(shù)組腎小管.間質(zhì)只有極少量MCP-1表達(dá)；模型組MCP-1表達(dá)主要位于腎小管上皮細(xì)胞，部分間質(zhì)細(xì)胞也有表達(dá)，且與炎性細(xì)胞浸潤(rùn)程度一致，柴苓湯組和纈沙坦組較模型組明顯減少。病理圖象半定量分析平均積分光密度、面密度：假手術(shù)組(119.05±52.80；0.38±0.19)，病理模型組(3148.57±60

10、7.22；17.76±3.45)，柴苓湯組(998.33±276.78；5.63±1.75)，纈沙坦組(1332.52±232.68；6.28±1.43)；病理模型組明顯高于假手術(shù)組；柴苓湯組較病理模型組兩項(xiàng)指標(biāo)明顯減少；纈沙坦組。MCP-1也較病理模型組兩項(xiàng)指標(biāo)明顯減少；柴苓湯組與纈沙坦組比較無顯著差異。 結(jié)論: 1.柴苓湯可以改善UUO梗阻性腎病模型的左腎重/右腎重比值、尿素氮等項(xiàng)指標(biāo)，提示柴苓湯有一定保護(hù)腎臟，改善

11、腎功能的作用。 2.柴苓湯對(duì)腎小管上皮細(xì)胞有一定保護(hù)作用，并可能通過保護(hù)腎小管上皮細(xì)胞減輕腎間質(zhì)纖維化。 3.柴苓湯能夠抑制腎小管上皮細(xì)胞表型轉(zhuǎn)化標(biāo)志物的α-SMA.表達(dá)，減緩腎小管間質(zhì)纖維化。 4.柴苓湯可能通過抑制MCP-1的生成，直接或間接限制炎癥反應(yīng)的放大過程，減少膠原纖維的合成和腎小管上皮細(xì)胞表型轉(zhuǎn)化，從而減緩腎小管間質(zhì)纖維化的進(jìn)程。提示疏解少陽、利水滲濕的柴苓湯是防治和延緩慢性腎功能衰竭進(jìn)展的有效方劑