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文檔簡介
1、目的:本研究通過觀察柴苓湯對慢性環(huán)孢素A腎病大鼠腎臟炎性介質(zhì)的影響,探討柴苓湯對CsA慢性腎毒性的保護(hù)作用及其機(jī)制,為該方在臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
方法:本試驗(yàn)研究選用健康、清潔級、雌性SD大鼠40只,體重約200g,適應(yīng)性飼養(yǎng)一周后,隨機(jī)分為4組:對照組(A組Control group)、模型組(B組CsA group)、纈沙坦組(C組 Valsartan group)、中藥組(D組Chailing group),每組各10
2、只。模型組給予CsA30mg·kg-1·d-1灌胃,對照組給予等容量橄欖油;此外,纈沙坦組予纈沙坦10mg·kg-1·d-1(阿拉伯膠制為混懸液),中藥組予柴苓湯3g·kg-1·d-1,經(jīng)水溶解后灌胃給藥。每周末分別置代謝籠中取尿。第28天,斷頭取血,迅速離心,留取血清、血漿標(biāo)本,-4℃保存,待用于血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)的檢測,并計(jì)算肌酐清除率(Ccr);迅速切取小塊腎臟組織固定,用于觀察腎臟病理改變;免疫組化采用ABC法檢
3、測單核細(xì)胞趨化蛋白-Ⅰ(MCP-Ⅰ)、腫瘤壞死因子-α(TNF-α);RT-PCR測定組織中MCP-ⅠmRNA、TNF-αmRNA的表達(dá)。
結(jié)果:
1柴苓湯對CsA慢性腎毒性大鼠腎功能的影響環(huán)孢素組大鼠尿素氮(BUN)、血肌酐(Scr)較對照組明顯升高(P<0.01),肌酐清除率(Ccr)較對照組明顯降低(P<0.01)。用藥后,纈沙坦組和中藥組尿素氮(BUN)、血肌酐(Scr)較模型組明顯降低(P<0.01),肌酐
4、清除率(Ccr)較模型組明顯升高(P<0.05)。
2腎組織病理形態(tài)學(xué)觀察HE染色結(jié)果:對照組腎小球、腎小管形體結(jié)構(gòu)基本正常,腎間質(zhì)未見明顯異常。環(huán)孢素組腎小管上皮細(xì)胞變性、濁腫甚則壞死脫落,腎間質(zhì)水腫,大量炎性細(xì)胞浸潤。纈沙坦組及中藥組較模型組病理改變輕,腎小管上皮細(xì)胞濁腫,腎間質(zhì)有少量炎性細(xì)胞浸潤。Masson染色結(jié)果:對照組腎小管基底膜結(jié)構(gòu)清晰正常,腎間質(zhì)膠原沉積未見明顯異常。環(huán)孢素組結(jié)構(gòu)紊亂,腎小管基底膜增厚、扭曲、斷
5、裂,大量膠原纖維沉積,表現(xiàn)出明顯的間質(zhì)纖維化特征。纈沙坦組及中藥組病理改變較輕,間質(zhì)膠原成分輕度增多。
3腎間質(zhì)纖維化評估模型組大鼠纖維化程度較對照組明顯升高(P<0.05)。用藥后,纈沙坦組及中藥組纖維化程度較模型組明顯降低(P<0.05),但兩組之間無明顯差異。
4腎間質(zhì)炎性細(xì)胞計(jì)數(shù)與對照組比較,模型組大鼠炎性細(xì)胞浸潤明顯增多(P<0.05)。與模型組相比,纈紗坦組、柴苓湯組大鼠炎性細(xì)胞浸潤減少有顯著性差異(P<
6、0.05)。與髓質(zhì)區(qū)相比,皮質(zhì)區(qū)炎性細(xì)胞浸潤明顯增多有顯著性差異(P<0.05);除外空白組,其他各組間,皮髓交界區(qū)較髓質(zhì)區(qū)炎性細(xì)胞浸潤減少有顯著性差異(P<0.05)。
5免疫組化法檢測單核趨化蛋白-1(MCP-1)、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)與對照組比較,模型組大鼠MCP-1及TNF-α蛋白水平明顯增強(qiáng)(P<0.05),與模型組相比,纈紗坦組、柴苓湯組大鼠MCP-1及TNF-α減少有顯著性差異(P<0.05)。MCP-
7、1主要表達(dá)于腎小管上皮細(xì)胞基底側(cè),TNF-α主要表達(dá)于腎小管上皮細(xì)胞內(nèi)。
6 RT-PCR檢測單核細(xì)胞趨化蛋白-1(MCP-1)mRNA、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)mRNA與對照組比較,模型組大鼠MCP-1 mRAN和TNF-αmRAN表達(dá)明顯升高(P<0.05)。與模型組相比,纈紗坦組、柴苓湯組大鼠MCP-1mRAN和TNF-α mRNA表達(dá)下降有顯著性差異(P<0.05)。柴苓湯組與纈沙坦組無顯著性差異(P>0.05)
8、。
7炎性細(xì)胞介質(zhì)與纖維化相關(guān)性分析將兩組大鼠腎組織MCP-1、TNF-α表達(dá)水平分別與相應(yīng)的纖維化指標(biāo)進(jìn)行相關(guān)性分析,結(jié)果顯示,MCP-I、TNF-α表達(dá)水平與腎小管間質(zhì)纖維化評分,均存在正相關(guān),相關(guān)系數(shù)分別為0.755,0.812,P均<0.05。
結(jié)論:
1本研究采用SD雌性大鼠,普通飲食,CsA30mg·kg-1·d-1灌胃4周建立CsA慢性腎毒性大鼠模型,實(shí)驗(yàn)大鼠尿素氮、血肌酐升高,肌酐清除率降低
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