柴苓湯對(duì)環(huán)孢素A慢性腎毒性大鼠RAS系統(tǒng)的作用.pdf

1、目的:觀察環(huán)孢素A(cyclospofine A,CsA),慢性腎毒性大鼠腎素活性(PRA)、血管緊張素Ⅱ(AngⅡ)水平、血管緊張素轉(zhuǎn)化酶(ACE)表達(dá),腎臟中血管緊張素Ⅰ(AngⅠ)mRNA、血管緊張素Ⅱ(AngⅡ)mRNA以及鹽皮質(zhì)激素受體(MR)mRNA表達(dá),研究柴苓湯對(duì)CsA慢性腎毒性的防治作用及機(jī)制。
　　 CsA是目前應(yīng)用于器官移植抗排斥反應(yīng)及多種自身免疫性疾病的治療藥物,其最主要的副作用為腎毒性,包括急性和慢性腎

2、毒性。CsA急性腎毒性呈劑量相關(guān)性,是由于腎臟入球小動(dòng)脈的收縮引起腎小球?yàn)V過(guò)率(GFR)下降以及腎功能急性惡化,無(wú)持久的病理改變,是可逆的。當(dāng)CsA劑量減低或停用后,腎臟血流動(dòng)力學(xué)紊亂可得以糾正,腎功能也可恢復(fù)正常。相反,CsA慢性腎毒性常伴有不可逆的結(jié)構(gòu)改變,其臨床特征為進(jìn)行性腎功能減退、腎臟小動(dòng)脈壁特別是入球小動(dòng)脈壁特征性玻璃樣變性、腎小管萎縮及不可逆的間質(zhì)纖維化,影響病人的長(zhǎng)期存活,雖采用多種藥物治療,但目前尚缺乏滿意的療效。

3、r>　　 慢性CsA腎病屬于中醫(yī)“水腫”、“腰痛”、“虛勞”、“關(guān)格”等范疇。藥毒傷腎,肝郁氣滯,脾腎虧虛,水濕內(nèi)停是本病的主要病機(jī)特點(diǎn)。治療上應(yīng)利水解毒、補(bǔ)益脾腎、疏肝理氣。柴苓湯由《傷寒雜病論》中的“小柴胡湯”和“五苓散”組合而成。該方首見(jiàn)于漢代《世醫(yī)得效方》,經(jīng)元代《丹溪心法》而傳承于世。柴苓湯由“柴胡、黃芩、半夏、人參、甘草、生姜、大棗、澤瀉、豬苓、茯苓、白術(shù)、桂枝”等藥物組成,具有利水瀉毒、疏肝健脾的功效,與CsA腎病的機(jī)制

4、相近,故用此觀察對(duì)慢性腎損傷后腎素-血管緊張素.醛固酮系統(tǒng)(RAS)的作用,為今后的臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 本實(shí)驗(yàn)采用SD(Sprague-Dawley)雌性大鼠,普通飲食,CsA30mg.kg-1.D-1灌胃4周建立CsA慢性腎毒性大鼠模型,給予柴苓湯、纈沙坦灌服,觀察了尿素氮(BUN)、血肌酐(Scr)、肌酐清除率(Ccr)、腎素活性(PRA)、血管緊張素Ⅱ(AngⅡ)以及腎臟中血管緊張素轉(zhuǎn)化酶(ACE)、血管緊張素Ⅰ

5、(AngⅠ)mRNA、血管緊張素Ⅱ(AngⅡ)mRNA以及鹽皮質(zhì)激素受體(MR)mRNA表達(dá),研究腎素-血管緊張素.醛固酮(RAS)系統(tǒng)與CsA慢性。腎毒性的關(guān)系,進(jìn)一步探討柴苓湯對(duì)CsA慢性腎毒性的預(yù)防作用及作用機(jī)制,從而為該方的臨床應(yīng)用提供科學(xué)的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 方法:選用健康清潔級(jí)雌性SD大鼠40只,體重200±10g,適應(yīng)性喂養(yǎng)一周后,逐一稱重按重量標(biāo)號(hào),按照隨即分配的原則分為4組:對(duì)照組(Control group)、

6、模型組(CsA group)、纈沙坦組(Valsartan group)、柴苓湯組(TCM group),每組10只。造模動(dòng)物給予CsA30mg·kg-1·d-1經(jīng)口灌服,對(duì)照組則給予等容量橄欖油。此外,纈沙坦組予纈沙坦10mg·kg-1·d-1,柴苓湯組予柴苓湯3g-kg-1·d-1,蒸餾水溶解后經(jīng)口灌胃,共28天。每周末將動(dòng)物放入代謝籠中,收集24小時(shí)尿液,并測(cè)體重(body weight,BW)。末次給藥后,禁食12小時(shí),斷頭取血

7、,用于血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)的檢測(cè),并計(jì)算肌酐清除率(Ccr);取左側(cè)腎臟組織,4％多聚甲醛液固定,脫水,石蠟包埋切片,以3μm的石蠟切片,行HE、Masson染色,用于觀察腎臟病理改變;放射免疫法檢測(cè)PRA、AngⅡ;免疫組化檢測(cè)血管緊張素轉(zhuǎn)換酶(ACE)的表達(dá);RT-PCR測(cè)定腎臟血管緊張素Ⅰ(AngⅠ)mRNA、血管緊張素Ⅱ(AngⅡ)mRNA以及鹽皮質(zhì)激素受體(MR)mRNA表達(dá)。
　　 結(jié)果:①生化指標(biāo):與

8、對(duì)照組比較,模型組大鼠血肌酐(Scr)和尿素氮(BUN)顯著上升,肌酐清除率(Ccr)降低(P＜0.01)。與模型組相比,纈紗坦組、柴苓湯組大鼠血肌酐(Scr)和尿素氮(BUN)顯著降低,肌酐清除率(Ccr)明顯升高(P＜0.01,P＜0.05)。②腎組織HE及Masson染色顯示:HE染色結(jié)果:對(duì)照組大鼠腎臟結(jié)構(gòu)基本正常,腎小管上皮細(xì)胞排列整齊,無(wú)濁腫,間質(zhì)無(wú)水腫,偶有炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。模型組腎間質(zhì)大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn),腎小管上皮細(xì)胞變性、濁

9、腫、脫落。纈沙坦組腎間質(zhì)有炎性細(xì)胞浸潤(rùn),腎小管上皮細(xì)胞濁腫,但較模型組為輕。柴苓湯組腎間質(zhì)可見(jiàn)炎性細(xì)胞浸潤(rùn)但較模型組明顯減少,腎小管上皮細(xì)胞輕度濁腫。Masson染色結(jié)果:對(duì)照組腎小管基底膜無(wú)斷裂,結(jié)構(gòu)清晰,膠原成分未增多。模型組結(jié)構(gòu)紊亂,腎小管間質(zhì)膠原成分顯著增多。纈沙坦組及柴苓湯組腎小管間質(zhì)有膠原成分沉積,但較模型組明顯減少。③放射免疫法檢測(cè)血清腎素活性(PRA)、血管緊張素Ⅱ(AngⅡ)的表達(dá):與對(duì)照組比較,模型組大鼠血清PRA和

10、AngⅡ水平明顯升高(P＜0.01)。與模型組相比,纈紗坦組、柴苓湯組大鼠血清PRA和AngⅡ水平下降有顯著性差異(P＜0.01,P＜0.05)。④放射免疫法檢測(cè)組織腎素活性(PRA)、血管緊張素Ⅱ(AngⅡ)的表達(dá):與對(duì)照組比較,模型組大鼠組織PRA和AngⅡ水平明顯升高(P＜0.01)。與模型組相比,纈紗坦組、柴苓湯組大鼠組織PRA和AngⅡ水平下降有顯著性差異(P＜0.01,P＜0.05)。⑤免疫組化檢測(cè)ACE表達(dá):對(duì)照組呈弱陽(yáng)性

11、,模型組表達(dá)明顯增強(qiáng),主要表達(dá)于腎小管上皮細(xì)胞,纈紗坦組及柴苓湯組表達(dá)明顯減弱。⑥RT-PCR檢測(cè)腎臟血管緊張素Ⅰ(AngⅠ)mRNA、血管緊張素Ⅱ(AngⅡ)mRNA、鹽皮質(zhì)激素受體(MR)mRNA的表達(dá):與對(duì)照組比較,模型組大鼠AngⅠ mRNA和AngⅡ mRNA表達(dá)明顯升高(P＜0.01)。與模型組相比,纈紗坦組、柴苓湯組大鼠AngⅠ mRNA表達(dá)下降有顯著性差異(P＜0.01)。柴苓湯組大鼠AngⅠ mRNA較纈沙坦組降低有顯

12、著性差異(P＜0.05)。與模型組相比,纈沙坦大鼠AngⅡ mRNA表達(dá)降低無(wú)顯著性差異(P＞0.05),柴苓湯組組大鼠AngⅡ mRNA表達(dá)降低有顯著性差異(P＜0.01)。柴苓湯組大鼠AngⅡ mRNA較纈沙坦組降低有顯著性差異(P＜0.05)。CsA對(duì)各組MRmRNA的表達(dá)無(wú)顯著性差異(P＞0.05)。
　　 結(jié)論:
　　 1.采用CsA灌胃誘導(dǎo)腎間質(zhì)損傷,導(dǎo)致大鼠尿素氮、血肌酐升高,肌酐清除率降低;腎臟組織病理顯