骨橋蛋白和核轉錄因子在慢性環(huán)孢素A腎毒性大鼠腎組織中的作用.pdf

1、目的：探討炎性介質骨橋蛋白(Osteopontin，OPN)的表達和核轉錄因子在大鼠慢性環(huán)孢素A(CsA)腎毒性中的作用。
　　方法：雄性Sprague-Dawley大鼠喂食低鹽飼料(0.05％鈉鹽)下分為兩組，正常對照組給予皮下注射橄欖油(1ml/kg/d)；慢性CsA腎毒性組給予皮下注射環(huán)孢素A(15mg/kg/d)4周。通過三色染色觀察腎小管間質纖維化程度和免疫組化觀察ED-1陽性細胞；采用RNA印跡、免疫組織化學染色方法檢

2、測OPN在mRNA和蛋白水平的表達；用凝膠電泳遷移率實驗(Electrophoretic mobility shift assay，EMSA)分析法和免疫印跡法測定核轉錄因子(NF-кB和 AP-1)的結合活性和IкB蛋白的表達。
　　結果：與對照組相比，毒性組大鼠表現為腎小管間質帶狀纖維化[(38.9±3.3)%vs.(0.0±0.0)%，P<0.01]和大量ED-1陽性細胞浸潤[(89±9)%vs.(7±2)%，P<0.01]

3、。與對照組相比，毒性組大鼠 OPN mRNA和蛋白的表達明顯增加[(729±37)% vs.(103±4)%，P<0.01]，分布于腎小管上皮細胞，其主要位于腎小管間質損傷部位。毒性組核轉錄因子NF-кB(218±19 vs.116±15，P<0.01)和AP-1(735±225 vs.101±4，P<0.01)結合活性顯著增加，而IкB蛋白的表達減少(9±7 vs.105±7，P<0.01)。直線相關分析示OPN mRNA的表達與腎小