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文檔簡介
1、目的:觀察地塞米松誘導(dǎo)的抑郁模型中Ahi1/Hap1復(fù)合體和糖皮質(zhì)激素受體(glucocoticod receptor,GR)的含量變化,從而探討在應(yīng)激狀態(tài)下,GR對Ahi1蛋白水平的調(diào)節(jié)作用。
方法:成年雄性ICR小鼠(體重25-30g)隨機分為2組,對照組和實驗組。對照組(Con組)予以生理鹽水注射;實驗組(DEX組)每天09:00-10:00皮下注射地塞米松注射液1mg/kg,連續(xù)21天,建立小鼠抑郁模型。3周后采用懸尾
2、實驗、強迫游泳實驗等行為學(xué)檢測驗證動物模型誘導(dǎo)的成功。采用 Western blot法測定Ahi1、Hap1、GR蛋白表達水平的變化及RT-PCR方法測定Ahi1 mRNA水平的表達水平變化。為進一步探討GR對Ahi1蛋白表達的改變,應(yīng)用地塞米松20mmol/l處理PC12細胞72小時,觀察PC12細胞內(nèi)Ahi1蛋白的表達,并采用核漿分離方法測定細胞漿和細胞核內(nèi)GR蛋白表達水平的變化。
結(jié)果:行為學(xué)結(jié)果表明與對照組相比,DEX
3、組小鼠懸尾靜止時間、游泳靜止時間明顯延長,糖水偏好實驗糖水?dāng)z入量明顯減少(P<0.05),提示地塞米松誘導(dǎo)的抑郁模型建立成功。Western blot結(jié)果證實:與Con組相比,DEX組GR表達水平均明顯下調(diào)(P<0.05):進一步研究顯示,與Con組相比,DEX組Ahi1表達水平與Hap1表達水平均明顯下調(diào)(P<0.05);而RT-PCR結(jié)果表明Ahi1 mRNA水平 DEX組較對照組無明顯改變(P>0.05)。免疫共沉淀實驗證實 Ah
4、i1能夠與GR相互作用。為證實Ahi1的改變與地塞米松處理后GR的改變相關(guān),在PC12細胞內(nèi)也觀察到地塞米松處理后GR表達和Ahi1表達的減少(P<0.05)。地塞米松處理后GR從胞漿內(nèi)向胞核轉(zhuǎn)移,提示GR的核轉(zhuǎn)移可能與胞漿內(nèi)Ahi1的穩(wěn)定性有關(guān)。
結(jié)論:地塞米松處理可能通過下調(diào)GR表達水平,增加GR由胞漿到胞核的轉(zhuǎn)移,減少GR與Ahi1的相互作用,可能導(dǎo)致胞漿中的Ahi1/Hap1復(fù)合體不穩(wěn)定而降解,從而降低Ahi1蛋白的水
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