稻瘟病菌過氧化物酶體形成相關基因MoPEX1、MoPEX4、MoPEX10在生長發(fā)育及致病過程中的作用.pdf

1、由稻瘟病菌（Magnaporthe oryzae）引起的稻瘟病是水稻生產中最為嚴重的病害之一。對稻瘟病的控制也是水稻生產研究中急需解決的難題。而稻瘟病菌基因功能研究的開展，則有利于更好地了解其病原真菌的生物學特性，從而提出更有針對性的防控措施。
　　過氧化物酶體(peroxisome)作為真核生物細胞內的一類單層膜細胞器，參與β-氧化、乙醛酸循環(huán)及活性氧的分解等生化反應，影響著病原真菌的生長發(fā)育、產孢、侵入、寄生等各個環(huán)節(jié)，在病原

2、真菌的致病過程中起著必不可少的作用。
　　過氧化物酶體自身不含有DNA，所有膜蛋白和基質酶類等均由核基因編碼，并在細胞質中合成后通過自身具有的定位信號蛋白（Peroxisome Targeting Signal，PTS）合成，從而被識別并轉運定位至過氧化物酶體上。參與過氧化物酶體形成的蛋白被稱為Peroxins，是由PEX基因編碼調控的。然而在過氧化物酶體的形成過程中，不同PEX基因間存有各種互作和分工，而不同物種間同一PEX基因

3、的功能也不盡相同。目前的研究發(fā)現，過氧化物酶體基質蛋白的轉運過程大致可以分為識別并與受體結合、定位、運輸、受體再循環(huán)等幾個環(huán)節(jié)。其中與信號蛋白結合的基質蛋白卸下并運輸裝配的工作則主要通過PEX2、PEX10、PEX12編碼的環(huán)脂結構完成。而PEX1、PEX4、PEX6等基因則起到了最后讓信號蛋白能夠回到細胞質中循環(huán)再利用的作用。然而，絲狀真菌中的過氧化物酶體形成相關基因的研究還是相當有限的。因此，對稻瘟病菌的PEX基因的研究是有意義、有

4、必要的。
　　關于稻瘟病菌中編碼環(huán)脂結構的MoPEX2、MoP EX12基因已有研究，而另一個結構因素Pex10p在稻瘟病菌中的作用機制尚不清楚，因此本文首先對稻瘟病菌中的MoPEX10基因進行了功能分析，結果發(fā)現:稻瘟病菌、小麥赤霉病菌以及粗糙脈孢霉菌中的PEX10蛋白序列最為接近。蛋白的亞細胞定位證明Mopex10p可定位于過氧化物酶體上。MoPEX10的敲除會造成過氧化物酶體基質蛋白的定位異常?！鱩opex10突變體的生理生

5、化代謝受到顯著影響，包括突變體的生長速率減緩、完全培養(yǎng)基上生長的菌落扁平、氣生菌絲密度降低;分生孢子的產量顯著降低;同時脂類物質的利用能力被破壞，活性氧的耐受性減弱，細胞壁完整性也受到影響;MoPEX10的缺失同時也使得稻瘟病菌的孢子萌發(fā)率及附著胞形成率顯著下降;24h培養(yǎng)后分生孢子內仍存有脂類物質;突變體附著胞膨壓相較于野生型菌株下降明顯。大麥及水稻接種實驗表明Δmopex10的致病能力均下降明顯，部分接種方式無法產生病斑，由此證實M

6、oPEX10為稻瘟病菌的致病過程中所必需的。
　　PEX1、PEX4是已知的調控過氧化物酶體信號蛋白循環(huán)再利用的重要基因。然而迄今為止，病原真菌中該機制的研究尚未有報道。因此，本文對稻瘟病菌MoP EX1、MoPEX4這兩個基因功能進行了分析，研究后發(fā)現:稻瘟病菌PEX1、PEX4與小麥赤霉病菌及粗糙脈孢霉菌中同源基因的蛋白序列最為接近。蛋白的亞細胞定位證明Mopex1p與Mopex4p可定位于新產生的過氧化物酶體上。MoPEX1

7、、MoPEX4的敲除均能夠造成過氧化物酶體基質蛋白的定位異常。Δmopex1與△mopex4突變體的生長速率減緩、完全培養(yǎng)基上生長的菌落扁平、氣生菌絲密度降低、黑色素化的程度下降;分生孢子的產量顯著降低;同時脂類物質的利用能力被破壞，活性氧的耐受性減弱，細胞壁完整性也受到影響;MoPEX1、MoPEX4的缺失均使得稻瘟病菌的孢子萌發(fā)率及附著胞形成率顯著下降;24h培養(yǎng)后突變體的分生孢子內仍存有脂類物質;突變體附著胞膨壓相較于野生型菌株下