轉(zhuǎn)基因骨髓基質(zhì)干細(xì)胞復(fù)合凍干骨組織工程骨研究.pdf

1、目前,深凍骨已商品化,免疫排斥反應(yīng)罕見發(fā)生,故該實(shí)驗(yàn)以凍干松質(zhì)骨作為基質(zhì)材料、轉(zhuǎn)染有血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子(VEGF)的骨髓基質(zhì)干細(xì)胞(BMSC)為種子細(xì)胞,這樣既保持了骨組織優(yōu)良的空間結(jié)構(gòu),又提供了種子細(xì)胞和血管化的刺激因子.希望能為骨缺損及缺血性骨病治療提供實(shí)驗(yàn)和理論依據(jù).1、兔骨髓基質(zhì)干細(xì)胞的體外培養(yǎng)目的:在體外進(jìn)行骨髓基質(zhì)干細(xì)胞的培養(yǎng)和擴(kuò)增,觀察其形態(tài)學(xué)特點(diǎn),為進(jìn)一步研究基因轉(zhuǎn)染對(duì)骨髓基質(zhì)干細(xì)胞體外轉(zhuǎn)化的影響和繪制生長(zhǎng)曲線加以比較

2、奠定工作基礎(chǔ).方法:貼壁法分離兔骨髓基質(zhì)干細(xì)胞,37℃,5％CO<,2>培養(yǎng)箱培養(yǎng),觀察原代及傳代細(xì)胞的生長(zhǎng)發(fā)育情況,并繪制生長(zhǎng)曲線;在礦化液中連續(xù)培養(yǎng),觀察其骨形成能力.2、逆轉(zhuǎn)錄病毒表達(dá)載體的構(gòu)建目的:構(gòu)建高效的逆轉(zhuǎn)錄病毒表達(dá)載體,為下一步實(shí)驗(yàn)作準(zhǔn)備.方法:將pT7Blue/hVEGF<,165>質(zhì)粒酶切獲得hVEGF<,165>基因片段,構(gòu)建pcDNA<,3>/hVEGF<,165>并用PA317細(xì)胞包裝,32℃G418培養(yǎng)48h