長(zhǎng)鏈非編碼RNA-TSLC1-AS1在人腦膠質(zhì)瘤中的表達(dá)及功能研究.pdf

1、腦膠質(zhì)瘤約占原發(fā)性顱內(nèi)腫瘤的40％~50%,是中樞神經(jīng)系統(tǒng)中最常見的腫瘤。傳統(tǒng)的治療手段包括手術(shù)治療,放療和化療。但由于膠質(zhì)瘤呈浸潤(rùn)性生長(zhǎng),腫瘤組織與周圍正常腦組織界限不清,手術(shù)難以全切,效果不佳,且術(shù)后易復(fù)發(fā)。放療和化療常作為術(shù)后的輔助手段,不能特異的殺傷腫瘤細(xì)胞,同時(shí)還可能產(chǎn)生中樞神經(jīng)系統(tǒng)的毒副作用,因而腦膠質(zhì)瘤的治療是神經(jīng)外科研究的難點(diǎn)之一。探索膠質(zhì)瘤治療的新途徑,尤其是從基因水平闡明膠質(zhì)瘤的發(fā)生、發(fā)展和演變機(jī)理,尋找有效的基因治

2、療的靶點(diǎn)是近年來神經(jīng)外科研究的的熱點(diǎn)。
　　長(zhǎng)鏈非編碼RNA(lncRNA)是一類轉(zhuǎn)錄本長(zhǎng)度大于200個(gè)核苷酸同時(shí)不編碼蛋白質(zhì)的RNA。研究表明lncRNA可在表觀遺傳學(xué),轉(zhuǎn)錄及轉(zhuǎn)錄后水平調(diào)控基因的表達(dá),調(diào)控的方式包括染色體修飾,轉(zhuǎn)錄激活或干擾等。lncRNA與腫瘤存在密切的關(guān)系,一些lncRNA在正常組織與腫瘤組織中的表達(dá)存在顯著的差異性,異常的lncRNA可能在腫瘤的發(fā)生中起重要作用,有理由預(yù)測(cè)lncRNA可能成為腫瘤診斷和判

3、斷預(yù)后以及治療效果的一個(gè)新的標(biāo)志物,同時(shí)lncRNA可以成為一個(gè)新的腫瘤基因治療的靶點(diǎn)。
　　目前關(guān)于lncRNA在中樞神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤中的報(bào)道甚少。許多研究表明,蛋白編碼基因TSLC1為腫瘤抑制基因,通常在許多腫瘤中被甲基化下調(diào),包括神經(jīng)膠質(zhì)瘤,神經(jīng)母細(xì)胞瘤,肺癌,鼻咽腫瘤,惡性黑色素瘤,食管癌,肝癌,乳腺癌,胃癌,胰腺癌,大腸癌,子宮頸癌和前列腺癌。而TSLC1的反義轉(zhuǎn)錄本TSLC1-AS1作為lncRNA家族成員之一,在腦膠質(zhì)瘤

4、中的表達(dá)及對(duì)膠質(zhì)瘤發(fā)生、發(fā)展的作用尚未見報(bào)道。
　　本研究采用定量PCR方法檢測(cè)了30例腦膠質(zhì)瘤組織、正常腦組織及人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞系U87,U251,SNB19中l(wèi)ncRNA-TSLC1-AS1和mRNA-TSLC1的表達(dá)情況,研究TSLC1-AS1在腦膠質(zhì)瘤組織與正常腦組織中表達(dá)的差異性,在不同級(jí)別腦膠質(zhì)瘤中表達(dá)的差異性,及其與TSLC1表達(dá)的相關(guān)性。結(jié)果發(fā)現(xiàn)與正常腦組織相比,TSLC1-AS1和TSLC1在腫瘤組織中的表達(dá)水平明

5、顯下調(diào)(P<0.05)。在病理分級(jí)較高的腦膠質(zhì)瘤組織中,TSLC1-AS1和 TSLC1的表達(dá)水平明顯低于在病理分級(jí)較低的腦膠質(zhì)瘤組織中的表達(dá)水平(P<0.05)。TSLC1-AS1的表達(dá)與TSLC1的表達(dá)呈正相關(guān)(R=0.66,P<0.01)。上述結(jié)果提示TSLC1-AS1在人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞中的表達(dá)水平顯著降低,其表達(dá)水平隨腦膠質(zhì)瘤惡性程度的增高而降低,可作為腦膠質(zhì)瘤診斷,臨床分級(jí)及判斷預(yù)后的分子指標(biāo)。
　　在此基礎(chǔ)上構(gòu)建了TSL

6、C1-AS1表達(dá)載體pcDNA-TSLC1-AS1,利用其轉(zhuǎn)染U87細(xì)胞株,獲得高表達(dá)TSLC1-AS1的U87細(xì)胞;應(yīng)用MTS分析法檢測(cè)TSLC1-AS1表達(dá)升高對(duì)U87細(xì)胞增殖的影響。應(yīng)用Transwell實(shí)驗(yàn)檢測(cè)TSLC1-AS1表達(dá)升高對(duì)U87細(xì)胞遷移能力的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)染了pcDNA-TSLC1-AS1的U87細(xì)胞系中TSLC1-AS1的表達(dá)上調(diào),明顯高于pcDNA control對(duì)照組(P<0.05),同時(shí)TSLC1的表達(dá)

7、也明顯上調(diào),高于pcDNA control對(duì)照組(P<0.05)。轉(zhuǎn)染pcDNA-TSLC1-AS1后24,48,72,96小時(shí),U87細(xì)胞增殖率顯著低于對(duì)照組(P<0.05)。遷移度與對(duì)照組相比顯著減少(P<0.05)。此后,我們利用TSLC1-AS1 siRNA質(zhì)粒轉(zhuǎn)染SNB19細(xì)胞株,獲得低表達(dá)TSLC1-AS1的SNB19,進(jìn)一步驗(yàn)證了TSLC1-AS1表達(dá)變化對(duì)膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖與遷移能力的影響。
　　結(jié)果發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)染了雙鏈TS

8、LC1-AS1-siRNA1及TSLC1-AS1-siRNA2的SNB-19細(xì)胞系中TSLC1-AS1的表達(dá)明顯下調(diào),在TSLC1-AS1-siRNA1干擾組中,TSLC1-AS1的表達(dá)下調(diào)約90%,明顯低于對(duì)照組(P<0.05),同時(shí)TSLC1的表達(dá)也明顯下調(diào),低于對(duì)照組(P<0.05)。在轉(zhuǎn)染了TSLC1-AS1-siRNA1正義鏈的SNB-19細(xì)胞系中TSLC1-AS1和TSLC1的表達(dá)明顯下調(diào),低于對(duì)照組(P<0.05)。而在轉(zhuǎn)

9、染了TSLC1-AS1-siRNA1反義鏈的SNB-19細(xì)胞系中,TSLC1的表達(dá)卻未見明顯下調(diào)(P>0.05)。該結(jié)果排除了TSLC1-AS1-siRNA1反義鏈對(duì)TSLC1的表達(dá)下調(diào)的脫靶效應(yīng),進(jìn)一步確認(rèn)了在SNB-19細(xì)胞系中下調(diào)TSLC1-AS1的表達(dá)可下調(diào)TSLC1的表達(dá)。用MTS法檢測(cè)轉(zhuǎn)染TSLC1-AS1-siRNA1及TSLC1-AS1-siRNA2后人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞株SNB19的增殖能力,轉(zhuǎn)染TSLC1-AS1后24,4