長鏈非編碼RNA CACNA1g-AS1在瘢痕疙瘩中的功能探究.pdf

1、背景:瘢痕疙瘩一種良性的皮膚增生性疾病，但由于其侵襲周邊正常組織，會造成患者的功能障礙和外形缺陷，加上其反復(fù)復(fù)發(fā)的特性，常常伴有的瘙癢和疼痛癥狀，嚴(yán)重影響了患者的生活質(zhì)量。瘢痕疙瘩發(fā)病原因未明，治療上缺乏公認(rèn)的有效手段，是目前整形美容外科治療的一大棘手問題。長鏈非編碼RNA(lncRNA)是一類長度大于200bp的非編碼RNA，從轉(zhuǎn)錄水平、轉(zhuǎn)錄后水平、表觀遺傳學(xué)等層面參與了諸多細(xì)胞進(jìn)程如細(xì)胞周期和增殖、分化、凋亡的調(diào)控，部分lncRNA

2、被發(fā)現(xiàn)參與惡性腫瘤、皮膚疾病的發(fā)生發(fā)展中。目前，世界范圍內(nèi)尚未有對瘢痕疙瘩lncRNA的研究報道。在我們課題組的前期研究中，發(fā)現(xiàn)了lncRNACACNA1G-AS1(CAS1)在瘢痕疙瘩組織中存在特異性高表達(dá)，提示其可能參與到瘢痕疙瘩形成機(jī)制中。
　　目的:在國內(nèi)外范圍內(nèi)，首次探究CAS1在瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞中的生物學(xué)功能，如對細(xì)胞增殖、細(xì)胞遷移、分泌細(xì)胞生長因子TGF-β、分泌Ⅰ型和Ⅲ型膠原蛋白、調(diào)控鈣通道蛋白Cav3.1表達(dá)等

3、的影響，以期發(fā)現(xiàn)治療瘢痕疙瘩的潛在靶點(diǎn)。
　　方法:取北京協(xié)和醫(yī)院整形美容外科就診的3名瘢痕疙瘩患者（簽署知情同意書）的部分瘢痕疙瘩組織進(jìn)行成纖維細(xì)胞原代及傳代培養(yǎng)，利用siRNA技術(shù)干擾CAS1的表達(dá)，檢測轉(zhuǎn)染效率及干擾效率達(dá)到要求后，再應(yīng)用細(xì)胞增殖檢測和細(xì)胞周期流式檢測技術(shù)探究對細(xì)胞增殖的影響，利用劃痕實(shí)驗(yàn)探究對細(xì)胞遷移的影響，利用qRT-PCR技術(shù)探究對細(xì)胞因子TGF-β、Ⅰ型和Ⅲ型膠原蛋白分泌的影響，以及對鈣通道蛋白Cav

4、3.1 mRNA（即CACNA1G）表達(dá)的影響，與轉(zhuǎn)染陰性對照序列的對照組進(jìn)行對比。
　　結(jié)果:(1)干擾CAS1表達(dá)的實(shí)驗(yàn)組與對照組相比，CAS1的干擾效率達(dá)到50％以上，可以進(jìn)行下一步實(shí)驗(yàn)。(2)在qRT-PCR檢測中，實(shí)驗(yàn)組的CACNA1G和Ⅰ型膠原蛋白mRNA表達(dá)明顯降低，分別為對照組的47％和59％;(3)劃痕實(shí)驗(yàn)中，實(shí)驗(yàn)組的劃痕愈合時間比對照組明顯延長;(4)實(shí)驗(yàn)組qRT-PCR中TGF-β和Ⅲ型膠原蛋白mRNA的表達(dá)