轉(zhuǎn)錄因子FOXC1和長(zhǎng)鏈非編碼RNA FOXCUT在口腔鱗癌組織中的表達(dá)及功能研究.pdf

1、目的:初步研究叉頭框基因C1(Forkhead box C1,FOXC1)在口腔鱗狀細(xì)胞癌(Oral squamous cell carcinoma,OSCC)組織中的表達(dá)及其在口腔鱗癌Tca8113和SCC-9細(xì)胞中的功能;并進(jìn)行與其鄰近長(zhǎng)鏈非編碼RNA(long non code RNA,LncRNA)之間的相關(guān)性分析研究,該LncRNA是位于FOXC1上游啟動(dòng)子臨近轉(zhuǎn)錄體(FOXC1 promoter upstream trans

2、cript,FOXCUT);初步研究LncRNA FOXCUT在OSCC組織中的表達(dá)及其在口腔鱗癌Tca8113和SCC-9細(xì)胞中的功能;初步研究FOXC1siRNAs(small interfering RNA,siRNA)與FOXCUT siRNAs轉(zhuǎn)染Tca8113細(xì)胞后抑制裸鼠腫瘤生長(zhǎng)情況。為探索口腔鱗癌發(fā)生機(jī)制、預(yù)后及治療提供新的線索及研究靶點(diǎn)。
　　方法:采用免疫組化技術(shù)(Immunohistochemistry,IH

3、C),蛋白印跡法(Western blot,WB)和實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈反應(yīng)法(QuantitativeReal time Polymerase Chain Reaction,Real TimePCR)檢測(cè)分析FOXC1在OSCC組織和臨近正常組織的表達(dá)水平;采用Real TimePCR方法檢測(cè)了FOXC1臨近LncRNAFOXCUT在OSCC組織內(nèi)的表達(dá)情況,并采用皮爾森相關(guān)性分析研究了FOXC1與FOXCUT的相關(guān)關(guān)系;敲低FOXC1及

4、FOXCUT表達(dá)后建立siRNAs序列,Real TimePCR法篩選有效siRNA序列后轉(zhuǎn)染至Tca8113和SCC-9細(xì)胞,并采用甲基噻唑基四唑(MethylThiazolylTetrazolium,MTS)細(xì)胞生長(zhǎng)檢測(cè)實(shí)驗(yàn),單細(xì)胞平板克隆實(shí)驗(yàn),劃痕實(shí)驗(yàn),CD133+亞群細(xì)胞成球?qū)嶒?yàn)初步驗(yàn)證FOXC1和FOXCUT在口腔鱗癌Tca8113細(xì)胞中的功能;建立FOXC1 siRNA和FOXCUT siRNA抑制Tca8113細(xì)胞增殖的B

5、ALB/c裸鼠荷瘤模型來(lái)驗(yàn)證FOXC1和FOXCUT的功能。
　　結(jié)果:第一部分:1、OSCC腫瘤組織中FOXC1表達(dá)高于癌旁組織;2、下調(diào)FOXC1表達(dá)可以抑制口腔鱗癌Tca8113和SCC-9細(xì)胞增殖;3、下調(diào)FOXC1表達(dá)可以抑制口腔鱗癌Tca8113和SCC-9細(xì)胞侵襲;4、下調(diào)FOXC1基因表達(dá)可以降低OSCC干細(xì)胞功能;5、下調(diào)FOXC1基因表達(dá)可以降低OSCC干細(xì)胞樣腫瘤細(xì)胞功能。
　　第二部分:1、OSCC腫

6、瘤組織中FOXCUT表達(dá)高于臨近癌旁組織;2、下調(diào)FOXCUT表達(dá)可以抑制口腔鱗癌Tca8113和SCC-9細(xì)胞增殖;3、下調(diào)FOXCUT表達(dá)可以抑制口腔鱗癌Tca8113和SCC-9細(xì)胞侵襲;4、下調(diào)FOXCUT表達(dá)可以降低OSCC干細(xì)胞樣腫瘤細(xì)胞功能;
　　第三部分:1、FOXC1與FOXCUT在基因序列中位置相關(guān);2、FOXC1與FOXCUT在OSCC腫瘤組織中表達(dá)相關(guān);3、下調(diào)FOXCUT可以抑制FOXC1的表達(dá);4、FO

7、XC1-LncRNA FOXCUT在OSCC發(fā)生機(jī)制中呈基因?qū)π问桨l(fā)揮功能。5、FOXC1和FOXCUT表達(dá)下調(diào)后抑制VEGF-A,MMP2,MMP9和MMP7的表達(dá)。
　　第四部分:1、FOXCUT siRNA和FOXC1 siRNA轉(zhuǎn)染人舌鱗癌Tca8113細(xì)胞后,裸鼠體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中腫瘤的生長(zhǎng)受到抑制,2、FOXCUT和FOXC1 mRNA表達(dá)降低,FOXC1蛋白表達(dá)降低。
　　結(jié)論:1、FOXC1和FOXCUT在OSCC腫