長鏈非編碼RNA LINC00638在食管鱗癌中的功能和作用機制研究.pdf

1、食管癌是我國常見的惡性腫瘤之一，在我國男性中的發(fā)病率排在第三位，女性中排在第五位。我國食管癌的病理類型多為食管鱗癌，目前對于食管鱗癌的治療手段有效，病人預后差，五年生存率低。因此研究食管鱗癌發(fā)生發(fā)展的分子機制，為食管鱗癌的臨床診斷和治療提供分子標志物或藥物靶點顯得尤為重要。
　　課題組前期通過對食管鱗癌組織樣本進行全基因組測序和比較基因組雜交分析，發(fā)現(xiàn)了一個高頻擴增區(qū)域14q32.2-32.33，且此區(qū)域的擴增與局部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切

2、相關。為了研究長鏈非編碼RNA在食管鱗癌中的功能和作用機制，我們在此擴增區(qū)域篩選出一個在食管鱗癌細胞中表達，并且其表達與DNA擴增相關的長鏈非編碼RNA，linc00638。通過RACE實驗、Northern blot實驗以及PCR實驗，我們確定了linc00638的全長核酸序列。在對食管鱗癌組織標本及其配對癌旁組織標本進行RNA原位雜交實驗時發(fā)現(xiàn)，linc00638的細胞定位發(fā)生了變化:在166例癌旁組織中，linc00638定位于細

3、胞核，而在84例癌組織中，linc00638定位于細胞核和細胞漿。Linc00638核漿均有分布的食管鱗癌組織樣本對應著更高的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率。
　　為了探究linc00638定位改變的分子機制，我們采用RNA pull-down實驗聯(lián)合質(zhì)譜分析，發(fā)現(xiàn)PTB可以和linc00638結(jié)合，并調(diào)控linc00638的表達和細胞定位。
　　體外的細胞實驗表明linc00638可以促進食管鱗癌細胞的增殖、克隆形成、侵襲遷移，促進淋巴內(nèi)皮

4、細胞的遷移和成管。體內(nèi)的動物實驗進一步證實linc00638可以促進食管鱗癌細胞在動物體內(nèi)的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。這些實驗結(jié)果表明linc00638具有促癌作用。
　　分子機制研究發(fā)現(xiàn)，位于細胞漿的linc00638可以直接與VEGF-C mRNA結(jié)合，并增加mRNA的穩(wěn)定性，促進VEGF-C的表達;此外，linc00638還可以與miR-216b相互作用，調(diào)控miR-216b靶基因KRAS的表達。
　　以上研究表明長鏈非編碼RNA