骶神經(jīng)刺激對(duì)脊髓損傷大鼠腸道機(jī)械屏障保護(hù)機(jī)制的初步探討.pdf

1、腸道功能障礙已經(jīng)逐漸被認(rèn)識(shí)到是影響脊髓損傷患者身心健康的一個(gè)重要因素。脊髓損傷后腸道功能障礙主要表現(xiàn)為腹痛、腹脹、便秘、大便失禁、自主反射失調(diào)。在嚴(yán)重的情況下，還將出現(xiàn)腸道細(xì)菌移位和內(nèi)毒素血癥，增加了全身炎癥反應(yīng)綜合征和多器官功能障礙綜合征發(fā)生率。傳統(tǒng)治療方法主要包括飲食，生活方式的改變，藥物治療，以及行為和生物反饋治療。手術(shù)治療主要包括回、結(jié)腸造口術(shù)，馬龍順行性灌腸和骶神經(jīng)刺激器移植術(shù)。其中，骶神經(jīng)刺激成為最熱門的研究方向之一。骶神經(jīng)

2、電刺激能夠促進(jìn)結(jié)腸蠕動(dòng)和增加直腸內(nèi)壓，恢復(fù)正常的排便功能，對(duì)腸道的機(jī)械屏障起到保護(hù)作用，減少腸道細(xì)菌及內(nèi)毒素等有害物質(zhì)進(jìn)入血液。但骶神經(jīng)電刺激對(duì)急性完全性脊髓損傷后腸道機(jī)械屏障的具體保護(hù)機(jī)制仍未被闡明，本實(shí)驗(yàn)旨在初步探討骶神經(jīng)電刺激對(duì)急性完全性脊髓損傷大鼠腸道機(jī)械屏障的保護(hù)機(jī)制。
　　目的:實(shí)驗(yàn)第一階段:研究不同骶神經(jīng)刺激電壓對(duì)脊髓損傷大鼠腸道的影響，尋求最佳的刺激參數(shù)。實(shí)驗(yàn)第二階段:使用該最佳刺激電壓研究骶3神經(jīng)根電刺激對(duì)急性完

3、全性脊髓損傷大鼠腸道機(jī)械屏障的影響。揭示急性完全性脊髓損傷大鼠內(nèi)毒素和腸道菌群突破腸機(jī)械屏障的方式，初步探討骶神經(jīng)電刺激對(duì)急性完全性脊髓損傷大鼠腸道機(jī)械屏障的保護(hù)機(jī)制，以及對(duì)內(nèi)毒素血癥和細(xì)菌移位的防護(hù)作用，為臨床治療提供理論依據(jù)和治療的新思路。
　　方法:實(shí)驗(yàn)第一階段:假手術(shù)組作為正常組，急性完全性脊髓損傷72h大鼠作為對(duì)照組，骶神經(jīng)電刺激組為實(shí)驗(yàn)組，使用Fehling法制作大鼠急性完全性脊髓損傷模型，脊髓損傷后，于右側(cè)骶3神經(jīng)根

4、植入雙極電極，采用從低到高的刺激強(qiáng)度直到大鼠的尾巴和下肢出現(xiàn)顫抖性運(yùn)動(dòng)（閾值），以此為基礎(chǔ)，采用四個(gè)刺激電壓(1V、2V、4V、8V)，波頻15Hz，波寬固定為210μs，刺激時(shí)間10s，間歇時(shí)間20s，每次刺激10min，休息10min，共持續(xù)2h，每天上午8:00-10:00，下午6:00-8:00刺激急性完全性脊髓損傷72h大鼠右側(cè)骶3神經(jīng)根，觀察腸道變化情況，記錄結(jié)腸及直腸生物電活動(dòng)，得出最佳刺激參數(shù)。實(shí)驗(yàn)第二階段:假手術(shù)組作為

5、正常組，急性完全性脊髓損傷大鼠作為對(duì)照組，使用最佳刺激參數(shù)刺激急性完全性脊髓損傷大鼠骶3神經(jīng)根作為實(shí)驗(yàn)組，對(duì)各組分別進(jìn)行內(nèi)毒素測(cè)定，腸道淋巴結(jié)、肝臟、脾臟細(xì)菌培養(yǎng)，腸道形態(tài)學(xué)觀察、緊密連接蛋白ZO-1的蛋白表達(dá)測(cè)定，分析骶神經(jīng)電刺激對(duì)急性完全性脊髓損傷大鼠腸道機(jī)械屏障以及對(duì)內(nèi)毒素血癥和細(xì)菌移位的防護(hù)作用的具體機(jī)制。
　　結(jié)果:
　　1、實(shí)驗(yàn)第一部分:實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組腸道生物電峰值均低于正常組。但實(shí)驗(yàn)組腸道生物電峰值均高于對(duì)照組

6、，其中刺激電壓4V組的腸道生物電峰值最接近正常組。
　　2、實(shí)驗(yàn)第二部分:對(duì)照組大鼠脊髓完全性損傷后立即出現(xiàn)尿潴留，腹脹、小腸腸管脹氣、腸壁透光性增強(qiáng);盲腸、結(jié)腸和直腸大量硬結(jié)糞便堆積、蠕動(dòng)減弱;腸道黏膜出現(xiàn)不同程度損傷;腸道上皮細(xì)胞之間細(xì)胞連接出現(xiàn)溶解、缺失;內(nèi)毒素血癥含量和細(xì)菌移位的數(shù)量不斷的增多。實(shí)驗(yàn)組大鼠電刺激后，腸道蠕動(dòng)增強(qiáng)，糞便排出，腸道粘膜及細(xì)胞連接得到不同程度改善，腸道血清內(nèi)毒素水平出現(xiàn)不同程度的下降且細(xì)菌移位數(shù)量

7、呈顯著性減少。
　　3、各組大鼠腸道組織提取蛋白后，經(jīng)western-blot檢測(cè)緊密連接蛋白ZO-1的變化趨勢(shì)，結(jié)果證實(shí)，各組ZO-1蛋白水平的表達(dá)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）。各組大鼠腸道石蠟包埋切片后，經(jīng)免疫組化觀察緊密連接蛋白ZO-1的分布，發(fā)現(xiàn)隨著時(shí)間的推移對(duì)照組ZO-1的分布出現(xiàn)不同程度的散亂、排列不規(guī)則，實(shí)驗(yàn)組ZO-1的分布得到不同程度的改善。
　　結(jié)論:
　　1、不同骶神經(jīng)刺激電壓均能夠改善脊髓損傷大鼠

8、腸道功能，其中刺激電壓4V對(duì)脊髓損傷后大鼠腸道功能的改善最明顯。
　　2、急性完全性脊髓損傷大鼠出現(xiàn)尿潴留、腹脹、脹氣、腸壁透光性增強(qiáng)、大量糞便堆積、蠕動(dòng)減弱等腸道功能障礙。
　　3、急性完全性脊髓損傷大鼠的腸道上皮細(xì)胞、細(xì)胞連接等機(jī)械屏障遭到破壞，出現(xiàn)不同程度的內(nèi)毒素血癥和腸道菌群移位。
　　4、骶神經(jīng)電刺激能夠通過(guò)增強(qiáng)腸道的蠕動(dòng)，排出腸內(nèi)容物，使腸道菌群數(shù)量減少，使上皮細(xì)胞、腸絨毛以及緊密連接等機(jī)械屏障破環(huán)得到不同