北極礁膜(Monostroma arcticum)多糖的提取分離、結構及抗凝血活性研究.pdf

1、北極礁膜(Monostroma arcticum)隸屬于綠藻門,綠藻綱,礁膜科,礁膜屬。其作為食用和藥用藻類有著悠久的歷史,多糖是其最重要的生物活性物質(zhì)。本文以北極礁膜為原料,提取分離其中的多糖成分,并對其理化性質(zhì)、結構特征以及抗凝血活性進行研究。研究結果如下:
　　藻體粉末依次經(jīng)冷水、熱水、稀堿液和濃堿液提取,得到四種粗多糖CN、HN、AN1和AN2,得率分別為8.65％、25.85％、0.55％和4.25％。采用化學、薄層層析

2、、氣相色譜以及高效液相色譜法,對四種多糖的理化性質(zhì)和單糖組成進行分析測定。結果表明,CN、HN、AN1和AN2的總糖含量分別為63.30％、64.30％、57.30％和55.17％;硫酸基含量為21.70％、28.60％、32.80％和30.40％;蛋白質(zhì)含量為7.35％、6.30％、13.50％和2.85％;CN主要由鼠李糖、木糖和葡萄糖組成,三者比例相似;HN主要由鼠李糖組成,含有微量木糖和葡萄糖;AN1主要由葡萄糖組成,含有微量鼠

3、李糖;AN2主要由鼠李糖組成,含有少量葡萄糖和半乳糖,以及微量木糖;四種粗多糖均含有微量葡萄糖醛酸。
　　采用強陰離子交換色譜和凝膠排阻色譜對多糖HN進一步進行分離純化,得到三個多糖組分HF0、HF3和HAF0。高效凝膠滲透色譜法分析表明,HF0、HAF0和HF3純度較高,重均分子量分別是940.85kDa、9.36kDa和73.96kDa,HF0分子量遠大于GF3,HF0部分酸水解后主鏈部分HAF0分子量較小;PMP柱前衍生高效

4、液相色譜法分析表明,HF0、HF3和HAF0的單糖組成均以鼠李糖為主,含有少量的葡萄糖和木糖,糖醛酸的類型為葡萄糖醛酸;HAF0和HF3的紅外光譜圖顯示,1256cm-1處有強的硫酸基特征吸收峰。
　　采用脫硫酸基反應、甲基化反應、紅外光譜和核磁共振波譜等方法對HAF0結構進行進一步研究。結果表明,HAF0的糖鏈主要含有→3)-α-L-Raaap(1→和→2)-α-L-Rhap(1→兩種連接方式,硫酸基主要位于→3)-α-L-Rh

5、ap(1→的C-2位和→2)-α-L-Rhap(1→的C-3位。另外,少量硫酸基團位于→3)-α-L-Rhap(1→的C-4位。
　　通過測定活化部分凝血活酶時間(APTT)、凝血酶原時間(PT)和凝血酶時間(TT),對多糖HAF0的抗凝血活性進行評價,以肝素作為陽性對照。結果表明HAF0能夠有效延長APTT和TT值,而對PT值無影響,說明HAF0抗凝血作用主要是通過抑制內(nèi)源性凝血途徑或共同凝血途徑來產(chǎn)生,不能夠抑制外源性凝血途經(jīng)