Reg Ⅳ在炎癥性腸病的表達及其對病變活動度的預測作用.pdf

1、背景和目的：
　　 炎癥性腸病(inflammatory bowel disease,IBD)是一組病因未明的非特異性腸道炎癥性疾病,包括潰瘍性結腸炎(ulcerative colitis,UC)和克羅恩病(Crohn’sdisease,CD)。近二十余年來,隨著人們生活方式的變化和診斷水平的提高,國內炎癥性腸病的發(fā)病率有逐年上升的趨勢。疾病是處于活動期還是靜止期直接關系到疾病的正確治療。IBD臨床表現(xiàn)復雜多變,診斷缺乏特異性的

2、指標,而且常因對病情活動的判斷不準確而延誤治療。目前臨床評價 IBD 活動與否主要通過臨床癥狀、實驗室生化指標、內鏡下的表現(xiàn)及病理等綜合判斷。其中 C-反應蛋白(CRP)幾乎全部由肝臟產生,短時間內(數(shù)小時)即可升高,而機體一旦恢復,CRP 又迅速恢復正常(6～7d)。CRP 可及時而敏感地反映炎癥活動,是目前臨床最為推崇的IBD活動性指標之一。另外,各國專家針對IBD制定出疾病活動指數(shù)(disease activity index),

3、對疾病的活動性進行量化處理,從而更客觀準確地反映疾病的活動性,幫助臨床醫(yī)師作出正確的醫(yī)療決策。評價 UC 活動度常采用Southerland 疾病活動指數(shù),也稱 Mayo 指數(shù),較為簡單實用,包括腹瀉、便血、粘膜表現(xiàn)、醫(yī)師評估病情幾個評價指標。Best的CDAI 計算法是國際上廣泛應用于臨床和科研的評價 CD 活動度的指標。根據腹痛、腹瀉、腹塊等8個變量,通過 1 周觀察計分,乘以規(guī)定的權重,求得各自分值,再計算積分。但少數(shù)患者尤其是某

4、些早期和復發(fā)患者,血生化表現(xiàn)不顯著,而且在疾病活動的早期內鏡也不能發(fā)現(xiàn)。有必要尋找新指標以更全面、準確地評價 IBD的炎癥活動度,為臨床應用奠定理論基礎。
　　 再生基因(regenerating gene,Reg)家族屬鈣依賴的植物血凝素超家族,主要在肝、胰和胃腸道發(fā)揮作用,是一組分泌性蛋白,與糖尿病、組織損傷、炎癥、腫瘤尤其是消化道腫瘤密切相關。根據Reg基因編碼蛋白的一級結構,Reg家族可分為四個亞型(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ)。R

5、eg Ⅳ 最早由 Hartupee 于2001首次從炎癥性腸病病人中分離。Reg Ⅳ 在正常人的胃腸道即有低表達,包括結腸、小腸、胃和胰腺。另外在結腸、膽囊、前列腺及胃等腫瘤組織中均可發(fā)現(xiàn) Reg Ⅳ表達顯著升高。目前關于 Reg Ⅳ的研究多集中其與胃腸道腫瘤的關系,研究表明RegⅣ起到了促增殖和抗凋亡的作用,但是在IBD中的具體表達及其在炎癥性腸病中的機制尚不清楚；炎癥性腸病中 Reg Ⅳ與炎癥指標如 C 反應蛋白及疾病活動度的關系仍

6、有待研究。因此我們運用免疫組化分析Reg Ⅳ 在UC、CD 及正常人腸粘膜上皮細胞中的表達情況。并進一步研究了RegⅣ表達與CRP、CDAI、Mayo指數(shù)的關系；以明確Reg Ⅳ是否可作為評價IBD活動度的新的指標。
　　 方法
　　 1 臨床取材 收集了 2008 年1月-2010年1月在我院消化內科門診和住院的IBD患者病變部位腸粘膜活檢標本61例,其中CD23例,UC38 例。同時還另外收集了25例健康體檢者的腸粘

7、膜標本。所有檢查對象在征求同意后,行結腸鏡或雙氣囊小腸鏡檢查并取活檢,所有IBD患者的病例資料至少由兩位消化專科醫(yī)師重新復習病史和資料,統(tǒng)一按照中華醫(yī)學會消化病學分會炎癥性腸病學科組制定的診斷指南進行診斷,并經組織病理學活檢得到確診。健康體檢者的腸粘膜標本取自排除顯著器質性病變且腸鏡下診斷為正常腸道的健康體檢者。同時采集了所有研究對象的血常規(guī)及生化指標。IBD的活動度主要參考 CDAI(Crohn's disease activity

8、index)和Mayo 指數(shù)(也稱作 Southerland DAI)。
　　 2 免疫組織化學:采用免疫組化方法檢測 RegⅣ在IBD組及健康體檢組中的蛋白表達情況。由兩名病理科醫(yī)師在不知道臨床資料的情況下獨立判定免疫組化染色的結果。染色結果綜合染色強度及陽性細胞百分數(shù)兩個方面進行半定量分析。
　　 3 病情分期 潰瘍性結腸炎及克羅恩病均根據臨床資料分為活動期和緩解期。評價 UC 活動度采用 Mayo 指數(shù),也稱作So

9、utherland 疾病活動指數(shù),較為簡單實用,包括腹瀉、便血、粘膜表現(xiàn)、醫(yī)師評估病情幾個評價指標,求得每例患者的分值。評價 CD的活動度采用 Best的CDAI計算法[1]。根據腹痛、腹瀉、腹塊等8個變量,通過1周觀察計分,乘以規(guī)定的權重,求得各自分值,再計算積分。
　　 4 病理學診斷 所有活檢標本均送南方醫(yī)院病理科進行處理由兩名資深病理醫(yī)生進行分析。病理論斷標準主要參考中華醫(yī)學會消化病學分會炎癥性腸病協(xié)作組于2007年制定

10、的我國炎癥性腸病診斷規(guī)范的共識意見。
　　 5 RT-PCR 檢測 RegⅣ mRNA 水平 采用逆轉錄.聚合酶鏈反應技術(RT-PCR)檢測 IBD 患者及健康體檢者中的mRNA 表達情況。
　　 6 統(tǒng)計學分析 結果以平均值±標準差(X±s)表示,RegⅣ表達情況在IBD及健康對照者之間的比較、RegⅣ表達情況在UC及CD中的比較、Reg Ⅳ表達情況在活動期及緩解期 UC 中的比較,Reg Ⅳ表達情況在UC及健康對照

11、者中的比較、Reg Ⅳ表達情況在活動期CD及緩解期CD中的比較均采用 Mann-WhitneyU 法。多組之間比較采用 One-Way ANOVA 檢驗。CRP 與 CDAI、Mayo 指數(shù)相關性采用 Pearson 相關分析。所有的統(tǒng)計結果以 P<0.05 作為有統(tǒng)計學意義；參數(shù)比較前均進行正態(tài)性檢驗和方差齊性檢驗,在符合正態(tài)分布和方差齊性的基礎上進行比較。
　　 結果
　　 1.RegⅣ 在IBD病人及健康人中的表達

12、情況
　　 我們通過免疫組化檢查觀察炎癥性腸病病人及健康查體者腸粘膜中 Reg Ⅳ表達情況。免疫組化結果顯示RegⅣ 蛋白主要著色于腸粘膜上皮細胞的胞漿。在健康查體者中 Reg Ⅳ的表達情況是:未表達(0 例),弱表達(19 例,76％),中度表達(4 例,16％),強表達(2例,8％)。在IBD 患者中,未表達(0 例),弱表達(17 例,27.9％),中度表達(17例,27.9％),強表達(27 例,44.2％)。
　

13、　 Reg Ⅳ 在炎癥性腸病病人腸粘膜中的表達較健康查體者顯著增加(P<0.05)。CD 與 UC 病人Reg Ⅳ的表達沒有顯著差異(P=0.503)。通過比較活動期 UC 病人較非活動期 UC,我們發(fā)現(xiàn)前者腸粘膜 Reg Ⅳ表達顯著增加(P<0.05)。而非活動期 UC 病人與健康查體者之間Reg Ⅳ的表達沒有顯著差異(P=0.406)。CD 無論活動與否,其Reg Ⅳ的表達量差異不大(P=0.515)。
　　 RT-PCR

14、 結果提示活動期 UC 中 RegⅣ 在mRNA水平明顯高于緩解期及健康人,而活動期與緩解期 CD 中 RegⅣ在mRNA水平均高于健康人。RT-PCR與免疫組化具有較好的一致性。
　　 2.Reg Ⅳ表達與IBD病人活動程度及 C 反應蛋白之間的關系
　　 接下來我們研究了 Reg Ⅳ表達水平與血清CRP濃度之間的關系。在UC病人中,血清CRP濃度隨著 Reg Ⅳ表達的增強而升高(P<0.05):Reg Ⅳ 在弱表達的

15、病人 CRP 為5.59±4.59mg/l,中度表達時 CRP 為13.73±10.86mg/l,而強表達時,CRP 為88.33±47.99mg/l。而在 CD 病人中,不同Reg Ⅳ表達水平病人所對應的CRP 濃度并無顯著差異(P=0.455),分別為弱表達:18.844±20.60 mg/l),中度表達:43.66±34.24mg/l,強表達 41.90±41.48mg/l。
　　 同時,我們研究了 Reg Ⅳ 與炎癥性腸

16、病活動度之間的關系。我們發(fā)現(xiàn)在RegⅣ 不同染色強度中 Mayo 指數(shù)分別為:弱表達4.58±1.88,中度表達 6.20±1.32,強表達 8.06±2.38?？梢?在 UC 患者中,Mayo指數(shù)隨著Reg Ⅳ表達的增強而升高。(P<0.05)。在CD病人中,Reg Ⅳ不同染色強度中 CDAI 指數(shù)分別為:弱表達 148.40±38.12,中度表達179.14±64.87,強表達241.36±136.95,可見,不同 Reg Ⅳ表達水

17、平所對應的CDAI 指數(shù)并無顯著差異(P=0.226)。CRP 濃度與UC及CD的炎癥活動度指數(shù)均呈正相關:Mayo指數(shù)(r=0.627.,P<0.05),CDAI(r=0.624,P<0.05)。
　　 結論
　　 1、在正常人中,已有低水平的RegⅣ表達,而IBD可伴有Reg Ⅳ表達水平的顯著增加?；顒悠赨C較緩解期的UCReg Ⅳ的表達增強；而CD無論活動與否,其RegⅣ的表達量差異不大。
　　 2、在UC