骨橋蛋白在炎癥性腸病發(fā)病機制中作用的研究.pdf

1、第一部分骨橋蛋白在炎癥性腸病患者結(jié)腸組織中的表達(dá)
　　 背景:骨橋蛋白(OPN)是一種分泌型磷酸化糖蛋白,在免疫性疾病的發(fā)病過程中起重要作用。近年來研究發(fā)現(xiàn)炎癥性腸病(IBD)患者血漿中OPN水平升高,在患者末端腸和結(jié)腸黏膜中發(fā)現(xiàn)OPN的表達(dá)。
　　 目的:了解OPN在IBD患者中的表達(dá)情況,探討OPN在IBD發(fā)病過程中的作用。方法:用免疫組化半定量方法檢測OPN在53例潰瘍性結(jié)腸炎(UC)、62例克羅恩病(CD)和15

2、例結(jié)腸腺瘤患者結(jié)腸組織中的表達(dá)。
　　 結(jié)果:OPN在結(jié)腸上皮細(xì)胞和固有層滲出細(xì)胞中均有表達(dá)。UC組(11.84±0.98)和CD組(10.04±1.37)結(jié)腸上皮細(xì)胞中OPN的平均光密度均低于結(jié)腸腺瘤組(12.64±1.45),UC組中結(jié)腸上皮細(xì)胞中OPN的表達(dá)高于CD組。UC組(20.31±4.50％)和CD組(12.69±3.06％)結(jié)腸固有層滲出細(xì)胞中OPN陽性表達(dá)率的表達(dá)均高于結(jié)腸腺瘤組(3.85±0.66％),UC組

3、結(jié)腸固有層滲出細(xì)胞中OPN的表達(dá)高于CD組。
　　 結(jié)論:OPN在IBD患者結(jié)腸黏膜中表達(dá),來源不同的OPN在IBD中的作用不同。結(jié)腸上皮細(xì)胞中OPN表達(dá)下調(diào)可能與腸黏膜屏障受損有關(guān),而在受損結(jié)腸滲出細(xì)胞中的表達(dá)增加則可能與免疫反應(yīng)有關(guān)。
　　 第二部分右旋葡聚糖硫酸鈉誘導(dǎo)的小鼠結(jié)腸炎中骨橋蛋白的變化
　　 背景:OPN在Th1免疫免疫反應(yīng)早期就有高水平的表達(dá),OPN在IBD患者結(jié)腸固有層細(xì)胞單核細(xì)胞中表達(dá)增加。

4、
　　 目的:觀察右旋葡聚糖硫酸鈉(DSS)誘導(dǎo)的小鼠結(jié)腸炎模型中OPN的變化,探討OPN介導(dǎo)的免疫反應(yīng)在IBD發(fā)病機制中所發(fā)揮的作用。
　　 方法:64只雄性BALB/c小鼠隨機分為A～H組:對照組(A組和E組)、UC模型組(B組和F組)以及柳氮磺吡啶(SASP)治療組(C組和G組)和英夫利西治療組(D組和H組)。A組和E組小鼠分別給予蒸餾水飲用23天和37天。B～D組和F～H組小鼠5％DSS溶液連續(xù)飲用9天,產(chǎn)生急性

5、期結(jié)腸炎模型,第10天開始以2.5％DSS溶液維持2周;F～H組小鼠第24天開始給予給予蒸餾水飲用2周。B組和F組不給任何治療;C組和G組小鼠于造模第10天開始給予SASP進(jìn)行干預(yù)治療,時間分別為2周和4周;D組和H組小鼠于造模第10天開始給予英夫利西單抗進(jìn)行干預(yù)治療,時間分別為2周和4周。觀察指標(biāo)包括小鼠一般情況、體重和結(jié)腸長度變化,行HE(HE)染色以確定結(jié)腸病理組織學(xué)變化程度。用酶聯(lián)免疫法(ELISA)檢測小鼠血漿中OPN的含量,

6、用免疫組化法檢測OPN在結(jié)腸組織中定位表達(dá)情況,用蛋白質(zhì)印記法(WB)和逆轉(zhuǎn)錄聚合酶聯(lián)反應(yīng)法(RT-PCR)分別檢測小鼠結(jié)腸組織中蛋白質(zhì)水平和mRNA水平OPN的表達(dá)情況。
　　 結(jié)果:同對照組小鼠相比,UC模型組小鼠出現(xiàn)明顯的結(jié)腸炎表現(xiàn),主要表現(xiàn)為一般情況差、腹瀉和便血、體重增長緩慢、結(jié)腸長度明顯變短以及HE染色病理組織學(xué)評分明顯升高。SASP和英夫利西單抗治療后,與UC模型組小鼠相比,一般狀況好轉(zhuǎn),腹瀉和便血癥狀逐漸消失,體

7、重增長,病理組織學(xué)評分下降。ELISA、免疫組化半定量、WB和RT-PCR等各種檢測均提示,UC模型組小鼠OPN的表達(dá)比對照組明顯增高,SASP治療組和英夫利西治療組OPN的表達(dá)均較UC模型組下降,SASP治療組和英夫利西治療組OPN的表達(dá)無統(tǒng)計學(xué)差異。
　　 結(jié)論:OPN介導(dǎo)的免疫反應(yīng)促進(jìn)了DSS誘導(dǎo)的小鼠結(jié)腸炎的發(fā)生。經(jīng)藥物治療后,DSS誘導(dǎo)的小鼠結(jié)腸炎炎癥程度減輕,OPN的表達(dá)降低。
　　 第三部分 OPN和Th1

8、/Th2類細(xì)胞因子在DSS誘導(dǎo)的小鼠結(jié)腸炎模型中的變化
　　 背景:OPN是Th1型免疫反應(yīng)的重要的調(diào)節(jié)因子。OPN在IBD患者表達(dá)增加。IBD患者存在Th1/Th2細(xì)胞因子的平衡漂移。
　　 目的:探討OPN與Th1/Th2細(xì)胞因子的表達(dá)在IBD發(fā)病中的作用。
　　 方法:造模及干預(yù)方法同第二部分。分別用ELISA法和RT-PCR法檢測DSS誘導(dǎo)的小鼠結(jié)腸炎模型治療前后OPN和各種細(xì)胞因子的變化。
　　

9、 結(jié)果:OPN檢測結(jié)果同第二部分。ELISA法檢測了小鼠血漿中TNF-α、IL-β、IFN-γ、IL-6和IL-10的濃度。UC模型組小鼠血漿TNF-α、IL-1β、IFN-γ、IL-6和IL-10水平均較對照組明顯增高,SASP和英夫利西干預(yù)治療后TNF-α、IL-1β、IFN-γ、IL-6較治療前降低,其中TNF-α在治療2周時降低有明顯統(tǒng)計學(xué)差異,IFN-γ和IL-6在治療4周時降低有明顯統(tǒng)計學(xué)差異。而IL-10水平較治療前升高,