基于超聲支氣管鏡活檢技術(shù)的肺癌分子診療新模式初探.pdf

1、第一部分 EBUS-TBNA技術(shù)在胸部腫瘤精確診斷中的應用
　　背景: 肺癌的精確診斷和分期是規(guī)范化治療的重要前提。近年來興起的氣管內(nèi)超聲引導針吸活檢技術(shù)(endobronchial ultrasound-guided transbronchial needleaspiration，EBUS-TBNA)是一種用于診斷縱隔、肺門淋巴結(jié)以及胸部疾病的微創(chuàng)方法，具有經(jīng)濟便捷、可反復活檢、獲取組織量大等多種優(yōu)勢，本研究旨在探討其在胸部腫瘤

2、精確診斷分期中的應用價值。
　　方法: 回顧性地分析2012年04月-2014年12月期間，就診于江蘇省腫瘤醫(yī)院胸外科的患者資料，包括住院部和門診病人，胸部CT或PET/CT檢查提示縱隔占位或縱隔及肺門淋巴結(jié)腫大≥1cm，所有患者行EBUS-TBNA檢查，陰性者進一步接受縱隔鏡檢查或胸腔鏡、開胸手術(shù)明確病變性質(zhì)。對患者的病理學檢查結(jié)果、對病變的準確率，靈敏度，特異度等指標進行統(tǒng)計分析。
　　結(jié)果: 本組共426例病例，EBU

3、S-TBNA明確淋巴結(jié)惡性轉(zhuǎn)移者378例，其中診斷為小細胞肺癌113例;非小細胞肺癌251例;EBUS-TBNA陰性者48例，其中10例最終證實為非小細胞肺癌的縱隔淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，2例為小細胞肺癌，其余36例為良性病變。EBUS-TBNA在縱隔病變或縱隔淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移診斷中的準確性、特異性和靈敏度分別為93.4％，100％，96.7％。其中70歲以下患者229例，70歲以上患者197例，檢查過程中，患者耐受性均較好，70歲以下患者與70歲以上患

4、者組，并發(fā)癥發(fā)生的概率無明顯差異。所有病人均無嚴重并發(fā)癥發(fā)生。
　　結(jié)論: 在以肺癌為主的胸部腫瘤的精確診斷分期中，EBUS-TBNA是一種安全的新型微創(chuàng)診斷技術(shù)平臺，具有很高的靈敏度、特異性和準確性，與縱隔鏡相比更安全、經(jīng)濟、快捷，有望逐步取代其成為肺癌精確分期的金標準。
　　第二部分基于EBUS-TBNA獲得的肺癌原發(fā)及轉(zhuǎn)移灶標本驅(qū)動基因突變譜對比研究
　　背景: 當前肺癌的治療模式已由單純“規(guī)范化”診療模式向“規(guī)

5、范化”與“個體化”并重治療模式轉(zhuǎn)變。個體化精準醫(yī)學(personalization and precisionmedicine，PPM)要求在精確診斷和分期的基礎(chǔ)上，對肺癌患者的分子特征進行不同部位連續(xù)、動態(tài)的觀察。如何同時獲取原發(fā)及轉(zhuǎn)移灶等不同部位、同一患者不同時間、且同時滿足病理及分子診斷的組織樣本，是當前困擾臨床醫(yī)生的難題之一。本研究旨在研究基于EBUS-TBNA技術(shù)獲取肺癌原發(fā)及轉(zhuǎn)移灶樣本的驅(qū)動基因突變譜差異，探討EBUS-TB

6、NA技術(shù)在肺癌個體化分子診療中的應用價值。
　　方法: 利用EBUS-TBNA技術(shù)，穿刺獲得8例肺癌患者原發(fā)灶和匹配的轉(zhuǎn)移灶。二代測序獲得原發(fā)灶及轉(zhuǎn)移灶的驅(qū)動基因突變譜，針對上述數(shù)據(jù)行統(tǒng)計學分析及生物信息學分析，探索肺癌原發(fā)灶及轉(zhuǎn)移灶驅(qū)動基因表達譜層面的共性及異質(zhì)性，并結(jié)合病例分析其臨床應用價值。
　　結(jié)果: 8例患者匹配組織中共檢測中313個突變，其中65個為頻發(fā)突變（原發(fā)灶32個，轉(zhuǎn)移灶33個），其中TP53突變出現(xiàn)最頻

7、繁。針對原發(fā)灶和轉(zhuǎn)移灶65個頻發(fā)突變和248個可能的“過客”基因變異對比分析提示原發(fā)灶和轉(zhuǎn)移灶發(fā)生的整體頻發(fā)變異一致性為94％，疑似“過客”突變重合率為63％。EBUS-TBNA的多位置動態(tài)監(jiān)測分析成功的指導了肺癌患者的治療（4號患者）。KEGGpathway分析顯示同時出現(xiàn)在原發(fā)灶和轉(zhuǎn)移灶中的變異基因主要富集在與腫瘤發(fā)生密切相關(guān)的RAS通路、TP53通路和MYC通路;僅在原發(fā)灶中發(fā)生變異的基因主要富集在PI3K通路和AR通路;僅在轉(zhuǎn)移

8、灶發(fā)生變異的基因主要富集在FGFR、CDH1(E-cadherin)及TGF-β通路。
　　結(jié)論: EBUS-TBNA技術(shù)平臺可提供滿足病理檢測及全基因組二代測序所需高質(zhì)量組織樣本，并在多部位、動態(tài)的多次獲取組織對驅(qū)動基因突變進行監(jiān)測方面具有重要價值?；贓BUS-TBNA技術(shù)獲得的肺癌原發(fā)灶及轉(zhuǎn)移灶驅(qū)動基因突變譜對比發(fā)現(xiàn):盡管超過90％的驅(qū)動基因突變相同，但轉(zhuǎn)移灶仍有不同于原發(fā)灶的重要驅(qū)動基因突變，可能是導致肺癌靶向治療耐藥或

9、進展的關(guān)鍵原因。
　　第三部分基于EBUS-TBNA獲取標本的肺癌轉(zhuǎn)移相關(guān)長非編碼RNA篩選及功能研究
　　背景: 肺癌的發(fā)病機制研究在基因組水平已獲得了很大進展，但NSCLC患者5年總體生存率仍徘徊于20-30％。前期我們利用EBUS-TBNA技術(shù)分析比較肺癌原發(fā)灶及轉(zhuǎn)移灶的驅(qū)動基因突變譜。而后基因組時代，RNA組學逐漸成為研究熱點。其中，長非編碼RNA(long non-coding RNA，lncRNA)在多種生物進程

10、和疾病進展中發(fā)揮重要作用，例如免疫反應、細胞分化、代謝、腫瘤發(fā)生及發(fā)展。本研究旨在通過比較原發(fā)灶及轉(zhuǎn)移灶之間的轉(zhuǎn)錄組表達譜差異可快速有效的篩選出調(diào)控肺癌侵襲轉(zhuǎn)移的關(guān)鍵基因。
　　方法: EBUS-TBNA獲取3對肺癌原發(fā)灶及轉(zhuǎn)移灶組織，利用lncRNA/mRNA共表達芯片技術(shù)，并結(jié)合生物信息學分析篩選鑒定出功能未知的lncRNALINC00313。qPCR分析LINC00313在62對NSCLC組織的表達譜及與臨床病理資料的相關(guān)性

11、，同時行劃痕試驗、transwell實驗、Matrigel實驗體內(nèi)研究LINC00313對NSCLC細胞遷移侵襲的影響。
　　結(jié)果: 相對于肺癌原發(fā)灶，轉(zhuǎn)移灶肺癌中mRNA和lncRNA的表達存在很大差異，而這些差異表達基因與腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移、細胞增值、細胞凋亡等功能相關(guān)。其中，LINC00313在NSCLC組織中表達上調(diào)，且高表達的LINC00313與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和晚期NSCLC顯著相關(guān)。體內(nèi)實驗顯示LINC00313可以通過介導MM

12、P9表達促進NSCLC的遷移侵襲。
　　結(jié)論: 肺癌原發(fā)灶及轉(zhuǎn)移灶中編碼基因和長非編碼基因的表達存在很大差異。LINC00313是一個新發(fā)現(xiàn)的表達上調(diào)的NSCLC相關(guān)lncRNA，且高表達的LINC00313與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和晚期NSCLC顯著相關(guān)。LINC00313能夠介導調(diào)控MMP9表達參與NSCLC的侵襲轉(zhuǎn)移，是潛在的預測淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的生物標志物。
　　綜上所述，在當前“規(guī)范化”與“個體化”并重的肺癌診療模式下，基于EBUS