甘露醇對骨髓間充質干細胞移植治療血管性癡呆大鼠行為學與海馬膽堿能系統(tǒng)的影響.pdf

1、第一部分血管性癡呆大鼠模型的制備
　　[目的]
　　探討制備理想的血管性癡呆(VD)動物模型方法，為研究VD提供理想的動物模型。
　　[方法]
　　將通過篩選的大鼠隨機分為假手術組與模型組。假手術組僅切開頸部皮膚，不結扎頸總動脈;模型組采用間隔3天先后分別結扎雙側頸總動脈的方法制備VD大鼠模型，造模術后4周用Morris水迷宮對兩組大鼠進行行為學檢測。
　　[結果]
　　造模術后4周，模型組大鼠的成活

2、率52.17％，成模率91.43％。行為學檢測結果表明，血管性癡呆模型大鼠有明顯的學習記憶障礙。
　　[結論]
　　采用改良后的雙側頸總動脈結扎法制備VD大鼠模型，具有高成模率、較高成活率、高重復性、癡呆癥狀穩(wěn)定等優(yōu)點，可以為VD的基礎研究提供理想的動物模型。
　　第二部分大鼠骨髓間充質干細胞的分離、培養(yǎng)和鑒定
　　[目的]
　　體外培養(yǎng)符合實驗要求的大鼠骨髓間充質干細胞(BMSCs)并進行鑒定，為進行細胞

3、移植提供一定數量且功能穩(wěn)定的種子細胞。
　　[方法]
　　無菌條件下取幼年雄性SD大鼠的股骨，采用全骨髓培養(yǎng)結合細胞貼壁法分離純化BMSCs。待細胞生長鋪滿塑料瓶底80％-90％左右時，用2.5g/L胰蛋白酶控制消化120S后，按1∶2進行擴增傳代。倒置相差顯微鏡下觀察原代及傳代后的細胞的形態(tài)。通過流式細胞儀檢測細胞表面標記物及向成骨細胞分化誘導后行堿性磷酸酶組織化學染色與茜素紅S染色對擴增后的BMSCs進行直接、間接鑒定。

4、
　　[結果]
　　大鼠BMSCs在體外可以分離培養(yǎng)擴增，分離培養(yǎng)的BMSCs形態(tài)呈長梭形，為貼壁生長的成纖維樣細胞，擴增傳代后的細胞形態(tài)趨于均一。經流式細胞儀檢測細胞表面標記CD44和CD90陽性率分別為89.4％和99.2％，而CD34的陽性率僅為1.82％，誘導BMSCs能分化為成骨細胞，堿性磷酸酶染色陽性，茜素紅S染色可見鈣結節(jié)。
　　[結論]
　　全骨髓培養(yǎng)結合細胞貼壁法可以成功體外培養(yǎng)大鼠BMSCs。

5、培養(yǎng)的BMSCs表達表面標記CD44和CD90陽性率高，可通過誘導向成骨細胞分化，具有多向分化潛能，所培養(yǎng)的細胞可用于細胞移植。
　　第三部分甘露醇對骨髓間充質干細胞移植治療血管性癡呆大鼠行為學與海馬膽堿能系統(tǒng)的影響
　　[目的]
　　觀察甘露醇對骨髓間充質干細胞(BMSCs)移植治療血管性癡呆(VD)大鼠行為學及海馬膽堿能系統(tǒng)活性的影響
　　[方法]
　　將經Morris水迷宮實驗鑒定為癡呆模型的32只大

6、鼠，隨機分為三組:
　?、俑事洞碱A處理BMSCs組（12只），甘露醇預處理后，尾靜脈注射移植BMSCs;
　　②BMSCs組（12只），尾靜脈注射移植BMSCs;
　?、叟囵B(yǎng)基組(8只)，尾靜脈注射等量BMSCs基礎培養(yǎng)基;還設假手術組（7只），暴露雙側頸總動脈但不結扎，不進行任何干預。BMSCs移植4周后進行Morris水迷宮試驗和大鼠海馬內乙酰膽堿酯酶(AChE)和膽堿乙酰轉移酶(ChAT)活性檢測。
　　[

7、結果]
　　BMSCs組大鼠移植BMSCs后，其AChE和ChAT活性均比培養(yǎng)基組有明顯提高(P＜0.05)，同時其行為學亦較培養(yǎng)基組有明顯改善(P＜0.05)。甘露醇預處理BMSCs組的AChE和ChAT活性均比BMSCs組、培養(yǎng)基組有更明顯提高(P＜0.05)，同時其行為學亦較BMSCs組、培養(yǎng)基組有更明顯改善(P＜0.05)。
　　[結論]
　　BMSCs組大鼠移植BMSCs后其AChE和ChAT活性均比培養(yǎng)基組