乳腺癌細(xì)胞中核受體ERRα表達(dá)受microRNA調(diào)控及該核受體調(diào)控趨化因子CCL2表達(dá)的分子機(jī)制研究.pdf

1、雌激素受體相關(guān)受體α(EstrogenReceptor-RelatedReceptoralpha,ERRα)是轉(zhuǎn)錄因子核受體超家族中孤兒核受體中的一員,因與雌激素受體α(ERα)在結(jié)構(gòu)上具有高度的同源性而被克隆。與ERα不同的是,目前尚未發(fā)現(xiàn)ERRα的天然配體。晶體結(jié)構(gòu)分析顯示ERRα能以配體非依賴的形式募集輔助調(diào)節(jié)因子,從而調(diào)控靶基因的表達(dá)。因此,ERRα被喻為組成性活化的孤兒核受體。
　　最近的研究顯示ERRα作為乳腺癌細(xì)胞龐

2、大分子信號(hào)網(wǎng)絡(luò)中最重要的組成部分之一,在乳腺癌的發(fā)生發(fā)展中扮演了重要的角色。首先,與癌旁組織相比,乳腺癌組織明顯過(guò)表達(dá)ERRα,其表達(dá)水平是乳腺癌預(yù)后的重要指標(biāo)。其次,ERRα能夠通過(guò)“串話”機(jī)制,對(duì)許多經(jīng)典的乳腺癌信號(hào)通路(如ERα信號(hào)通路、HER2信號(hào)通路)的信號(hào)傳遞進(jìn)行干預(yù)。第三,ERRα及其輔助活化因子PGC-1家族是以PI3K/AKT為第二信使的多條促癌信號(hào)通路的交匯點(diǎn)。被激活的ERRα/PGC-1復(fù)合體能夠激活一系列與腫瘤細(xì)

3、胞能量代謝、細(xì)胞增殖、遷移侵襲相關(guān)的靶基因的表達(dá),最終促進(jìn)乳腺癌的發(fā)展。
　　簡(jiǎn)而言之,ERRα是一個(gè)廣泛表達(dá)于各類型乳腺癌細(xì)胞,能夠獨(dú)立地或協(xié)同性地參與乳腺癌進(jìn)程的信號(hào)分子。因此,尋找調(diào)節(jié)其活性或表達(dá)水平的方法,解析其參與乳腺癌進(jìn)程的具體分子機(jī)制,對(duì)深入了解ERRα在乳腺癌發(fā)展中的作用,尋找以ERRα為靶點(diǎn)的乳腺癌治療策略具有重大意義。鑒于此,我們進(jìn)行了以下兩方面的研究:
　　首先,我們從ERRα自身表達(dá)調(diào)控機(jī)制的角度入手

4、,詳細(xì)剖析了microRNA對(duì)ERRα表達(dá)調(diào)節(jié)的具體機(jī)制,及其對(duì)乳腺癌細(xì)胞增殖和侵襲能力的影響。主要取得了以下研究結(jié)果:
　　1.利用生物信息學(xué)和Westernblot技術(shù)篩選出能夠在乳腺癌細(xì)胞中影響ERRα表達(dá)的microRNA—miR-137。
　　2.利用報(bào)告基因分析結(jié)合定點(diǎn)突變技術(shù),詳細(xì)解析了miR-137與ERRα3’-UTR結(jié)合的精確位點(diǎn)。ERRα的3’-UTR擁有兩個(gè)功能性的miR-137結(jié)合位點(diǎn)分別位于ERR

5、α3’-UTR480~486nt和596~602nt。
　　3.我們檢測(cè)了內(nèi)源性miR-137和ERRα在正常乳腺上皮細(xì)胞和各乳腺癌細(xì)胞株中的表達(dá)水平。相較于正常乳腺上皮細(xì)胞,乳腺癌細(xì)胞明顯高表達(dá)ERRα而缺失miR-137。
　　4.用Real-timePCR和Westernblot技術(shù)證實(shí),miR-137可以同時(shí)在mRNA水平和蛋白水平抑制ERRα的表達(dá),且該效應(yīng)只特異的針對(duì)ERRα而不影響該家族其他成員的表達(dá)。

6、　　5.miR-137還可以通過(guò)ERRα影響其下游靶基因的表達(dá),并對(duì)乳腺癌細(xì)胞的生物學(xué)特性產(chǎn)生影響。具體來(lái)說(shuō),miR-137可通過(guò)下調(diào)ERRα顯著抑制乳腺癌細(xì)胞株MCF-7、BT-474和SK-BR-3的增殖。而對(duì)于乳腺癌細(xì)胞株MDA-MB-231,miR-137雖然不能抑制其增殖速度,但能通過(guò)ERRα削弱其遷移侵襲能力。
　　6.我們分別以SK-BR-3和MDA-MB-231為細(xì)胞模型,詳細(xì)分析了miR-137抑制乳腺癌細(xì)胞增殖

7、和遷移侵襲的分子機(jī)制。結(jié)果顯示,miR-137能抑制ERRα-CCNE1和ERRα-WNT11這兩條分別在細(xì)胞增殖和細(xì)胞遷移侵襲中發(fā)揮重要功能的通路,是其發(fā)揮抑癌效應(yīng)的重要原因。
　　在論文的第二部分,我們還對(duì)ERRα促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞的生物學(xué)特性發(fā)生惡性轉(zhuǎn)變的具體機(jī)制做了初步探索,研究結(jié)果提示,與乳腺癌的發(fā)生發(fā)展和惡性轉(zhuǎn)歸有著密切聯(lián)系的趨化因子CCL2/MCP-1可能是ERRα的一個(gè)新的靶基因,我們發(fā)現(xiàn):
　　1.相較于正常乳

8、腺上皮細(xì)胞,CCL2的基礎(chǔ)表達(dá)水平在乳腺癌細(xì)胞中明顯增高。
　　2.調(diào)節(jié)乳腺癌細(xì)胞中ERRα的表達(dá)水平能夠相應(yīng)的影響CCL2的表達(dá)。
　　3.用特異的ERRα反向激動(dòng)劑XCT-790抑制ERRα的轉(zhuǎn)錄因子活性,能夠顯著地抑制乳腺癌細(xì)胞中CCL2基因的轉(zhuǎn)錄。
　　4.報(bào)告基因活性分析顯示ERRα能夠誘導(dǎo)CCL2基因啟動(dòng)子的轉(zhuǎn)錄活性。初步分析認(rèn)為CCL2基因啟動(dòng)子-2794bp~-820bp的遠(yuǎn)端調(diào)控區(qū)域可能存在ERRα的