局部應用醫(yī)用生物蛋白膠緩釋神經(jīng)生長因子對損傷視神經(jīng)和視網(wǎng)膜節(jié)細胞保護作用的實驗研究.pdf

1、第一部分醫(yī)用生物蛋白膠釋放神經(jīng)生長因子(NGF)的過程 目的：明確以醫(yī)用生物蛋白膠為載體的NGF體外釋放速度。方法：分別以全量和半量主體膠溶解液配制醫(yī)用生物蛋白膠，并分別在兩種生物蛋白膠中加入NGF，置于培養(yǎng)基中，不同時間檢測培養(yǎng)基中NGF的含量。結果：全量和半量主體膠溶解液配制醫(yī)用生物蛋白膠內(nèi)NGF在0、2、4、6、8、10小時分別釋放20％、40％、50.7％、80％、100％和20％、40％、50.7％、60％、80％、1

2、00％。結論：醫(yī)用生物蛋白膠作為NGF載體，體外有一定的緩釋作用，該作用與醫(yī)用生物蛋白膠稀釋濃度無關。 第二部分視神經(jīng)不完全損傷動物模型的建立 目的：建立視神經(jīng)不完全損傷動物模型。方法：實驗動物分A、B、C三組，以動脈瘤夾臨時阻斷夾直接鉗夾致傷視神經(jīng)，三組鉗夾時間分別為10秒、30秒和60秒，傷后檢測閃光刺激視覺誘發(fā)電位(F-VEP)、視神經(jīng)組織切片和視網(wǎng)膜節(jié)細胞計數(shù)。結果：F-VEPP1波：A組傷后1天波幅上升，第14

3、天和第28天波幅逐漸下降，潛伏期逐漸延長；B組傷后1天和第14天波幅進行性下降，潛伏期延長，第28天電活動消失；C組傷后第1天波幅下降潛伏期延長，第14天和第28均未檢測到電活動。傷后7天視神經(jīng)組織切片：A、B、C組視神經(jīng)受損面積分別為約30％、50％和70％。視網(wǎng)膜節(jié)細胞計數(shù)：A、B、C組傷后14天分別比正常減少37.4％、50.1％、55.9％，傷后28天分別比正常減少46.5％、65.2％、65.4％。結論：動脈瘤夾臨時阻斷夾直接

4、鉗夾視神經(jīng)30秒，可建立較好的視神經(jīng)不完全損傷模型。 第三部分視神經(jīng)不完全損傷動物模型視神經(jīng)NGF高親和受體TrkA表達及局部緩釋NGF對其表達影響 目的：了解TrkA在不完全損傷視神經(jīng)上的表達及醫(yī)用生物蛋白膠局部緩釋NGF對其表達影響。方法：以RT-PCR方法檢測正常視神經(jīng)、損傷后和損傷后局部應用醫(yī)用生物蛋白膠緩釋神經(jīng)生長因子3、5、7、10天視神經(jīng)的TrkAmRNA。結果：正常組相對值為0.44±0.06；損傷組和N

5、GF組3天后表達有明顯增高，其中損傷組第3、5、7、10天分別增高至正常的7.1、35.0、19.6和9.5倍，NGF組第3、5、7、10天分別增高至正常的8.0、32.4、20.4和8.5倍，兩組之間不同時間測定值均差異無顯著性(P＞0.1)，兩組與正常比較差異有顯著性(P＜0.01)。結論：視神經(jīng)不完全損傷后TrkA表達短期內(nèi)增高，局部應用醫(yī)用生物蛋白膠緩釋NGF不影響其表達。 第四部分局部應用醫(yī)用生物蛋白膠緩釋NGF對損傷

6、視神經(jīng)和視網(wǎng)膜節(jié)細胞保護作用 目的：明確局部應用醫(yī)用生物蛋白膠緩釋NGF是否對損傷視神經(jīng)和視網(wǎng)膜節(jié)細胞有保護作用。方法：動物分為假手術組、空白對照組、NGF肌注組和實驗組，NGF肌注組術后肌注NGF450U/d×10d，實驗組術中損傷視神經(jīng)局部注入生物蛋白膠0.2ml(含NGF450U)，分別于術后第14天和術后第28天進行F-VEP檢測、視神經(jīng)組織學檢查和視網(wǎng)膜節(jié)細胞計數(shù)。結果：F-VEP：假手術組、空白對照組、NGF肌注組和

7、實驗組第14天P1潛伏期(ms)分別為44.56±4.20、89.10±6.80、64.84±4.73和50.62±3.70，P1波幅(μV)分別為16.00±2.40、6.63±1.06、8.87±1.69和12.57±1.57，第28天P1潛伏期(ms)分別為47.26±4.07、200、92.62±6.47和63.77±5.33，P1波幅(μV)分別為13.80±2.11、0、5.40±0.87和8.53±1.13，各組不同時間測

8、定值均差異有顯著性(P＜0.05)。視神經(jīng)組織學：空白對照組、NGF肌注組和實驗組傷后第14天神經(jīng)纖維分別殘存30％、40％和50％，傷后第28天分別為0、15％和35％。視網(wǎng)膜節(jié)細胞計數(shù)：空白對照組術后第14天、28天細胞數(shù)比正常減少50.1％和65.2％；NGF肌注組術后14天、28天細胞數(shù)比正常減少33.9％和48.3％；實驗組術后第14天、28天細胞數(shù)比正常減少20.8％和30.6％。各組之間均差異有顯著性(P＜0.01)。結論