局部應(yīng)用醫(yī)用生物蛋白膠緩釋神經(jīng)生長(zhǎng)因子對(duì)損傷視神經(jīng)和視網(wǎng)膜節(jié)細(xì)胞保護(hù)作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、第一部分醫(yī)用生物蛋白膠釋放神經(jīng)生長(zhǎng)因子(NGF)的過(guò)程 目的：明確以醫(yī)用生物蛋白膠為載體的NGF體外釋放速度。方法：分別以全量和半量主體膠溶解液配制醫(yī)用生物蛋白膠，并分別在兩種生物蛋白膠中加入NGF，置于培養(yǎng)基中，不同時(shí)間檢測(cè)培養(yǎng)基中NGF的含量。結(jié)果：全量和半量主體膠溶解液配制醫(yī)用生物蛋白膠內(nèi)NGF在0、2、4、6、8、10小時(shí)分別釋放20％、40％、50.7％、80％、100％和20％、40％、50.7％、60％、80％、1

2、00％。結(jié)論：醫(yī)用生物蛋白膠作為NGF載體，體外有一定的緩釋作用，該作用與醫(yī)用生物蛋白膠稀釋濃度無(wú)關(guān)。 第二部分視神經(jīng)不完全損傷動(dòng)物模型的建立 目的：建立視神經(jīng)不完全損傷動(dòng)物模型。方法：實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分A、B、C三組，以動(dòng)脈瘤夾臨時(shí)阻斷夾直接鉗夾致傷視神經(jīng)，三組鉗夾時(shí)間分別為10秒、30秒和60秒，傷后檢測(cè)閃光刺激視覺誘發(fā)電位(F-VEP)、視神經(jīng)組織切片和視網(wǎng)膜節(jié)細(xì)胞計(jì)數(shù)。結(jié)果：F-VEPP1波：A組傷后1天波幅上升，第14

3、天和第28天波幅逐漸下降，潛伏期逐漸延長(zhǎng)；B組傷后1天和第14天波幅進(jìn)行性下降，潛伏期延長(zhǎng)，第28天電活動(dòng)消失；C組傷后第1天波幅下降潛伏期延長(zhǎng)，第14天和第28均未檢測(cè)到電活動(dòng)。傷后7天視神經(jīng)組織切片：A、B、C組視神經(jīng)受損面積分別為約30％、50％和70％。視網(wǎng)膜節(jié)細(xì)胞計(jì)數(shù)：A、B、C組傷后14天分別比正常減少37.4％、50.1％、55.9％，傷后28天分別比正常減少46.5％、65.2％、65.4％。結(jié)論：動(dòng)脈瘤夾臨時(shí)阻斷夾直接

4、鉗夾視神經(jīng)30秒，可建立較好的視神經(jīng)不完全損傷模型。 第三部分視神經(jīng)不完全損傷動(dòng)物模型視神經(jīng)NGF高親和受體TrkA表達(dá)及局部緩釋NGF對(duì)其表達(dá)影響 目的：了解TrkA在不完全損傷視神經(jīng)上的表達(dá)及醫(yī)用生物蛋白膠局部緩釋NGF對(duì)其表達(dá)影響。方法：以RT-PCR方法檢測(cè)正常視神經(jīng)、損傷后和損傷后局部應(yīng)用醫(yī)用生物蛋白膠緩釋神經(jīng)生長(zhǎng)因子3、5、7、10天視神經(jīng)的TrkAmRNA。結(jié)果：正常組相對(duì)值為0.44±0.06；損傷組和N

5、GF組3天后表達(dá)有明顯增高，其中損傷組第3、5、7、10天分別增高至正常的7.1、35.0、19.6和9.5倍，NGF組第3、5、7、10天分別增高至正常的8.0、32.4、20.4和8.5倍，兩組之間不同時(shí)間測(cè)定值均差異無(wú)顯著性(P＞0.1)，兩組與正常比較差異有顯著性(P＜0.01)。結(jié)論：視神經(jīng)不完全損傷后TrkA表達(dá)短期內(nèi)增高，局部應(yīng)用醫(yī)用生物蛋白膠緩釋NGF不影響其表達(dá)。 第四部分局部應(yīng)用醫(yī)用生物蛋白膠緩釋NGF對(duì)損傷

6、視神經(jīng)和視網(wǎng)膜節(jié)細(xì)胞保護(hù)作用 目的：明確局部應(yīng)用醫(yī)用生物蛋白膠緩釋NGF是否對(duì)損傷視神經(jīng)和視網(wǎng)膜節(jié)細(xì)胞有保護(hù)作用。方法：動(dòng)物分為假手術(shù)組、空白對(duì)照組、NGF肌注組和實(shí)驗(yàn)組，NGF肌注組術(shù)后肌注NGF450U/d×10d，實(shí)驗(yàn)組術(shù)中損傷視神經(jīng)局部注入生物蛋白膠0.2ml(含NGF450U)，分別于術(shù)后第14天和術(shù)后第28天進(jìn)行F-VEP檢測(cè)、視神經(jīng)組織學(xué)檢查和視網(wǎng)膜節(jié)細(xì)胞計(jì)數(shù)。結(jié)果：F-VEP：假手術(shù)組、空白對(duì)照組、NGF肌注組和

7、實(shí)驗(yàn)組第14天P1潛伏期(ms)分別為44.56±4.20、89.10±6.80、64.84±4.73和50.62±3.70，P1波幅(μV)分別為16.00±2.40、6.63±1.06、8.87±1.69和12.57±1.57，第28天P1潛伏期(ms)分別為47.26±4.07、200、92.62±6.47和63.77±5.33，P1波幅(μV)分別為13.80±2.11、0、5.40±0.87和8.53±1.13，各組不同時(shí)間測(cè)

8、定值均差異有顯著性(P＜0.05)。視神經(jīng)組織學(xué)：空白對(duì)照組、NGF肌注組和實(shí)驗(yàn)組傷后第14天神經(jīng)纖維分別殘存30％、40％和50％，傷后第28天分別為0、15％和35％。視網(wǎng)膜節(jié)細(xì)胞計(jì)數(shù)：空白對(duì)照組術(shù)后第14天、28天細(xì)胞數(shù)比正常減少50.1％和65.2％；NGF肌注組術(shù)后14天、28天細(xì)胞數(shù)比正常減少33.9％和48.3％；實(shí)驗(yàn)組術(shù)后第14天、28天細(xì)胞數(shù)比正常減少20.8％和30.6％。各組之間均差異有顯著性(P＜0.01)。結(jié)論